[發(fā)明專利]一種類蛇毒三肽的合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111504220.4
• 申請(qǐng)日: 2021-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113896763B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王輝平;劉慧敏;傅小明;應(yīng)佳偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司
• 主分類號(hào): C07K5/083
• 分類號(hào): C07K5/083;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;A61K8/64;A61Q19/08
• 代理公司: 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696
• 代理人: 李宇翔

1.一種類蛇毒三肽的合成方法，其特征在于，包括下述步驟：

S1、合成H-Dab(Boc)-NHBzl：

在四氫呋喃中，F(xiàn)moc-Dab(Boc)-OH、芐胺、NMM、EDCI反應(yīng)得到Fmoc-Dab(Boc)-NHBzl，然后用包含哌啶的四氫呋喃溶液脫除Fmoc保護(hù)基，得到H-Dab(Boc)-NHBzl；

S2、合成Boc-β-Ala-Pro-OH：

在四氫呋喃中，Boc-β-Ala-OH、H-Pro-OMe·HCl、NMM、HOBT、EDCI反應(yīng)得到Boc-β-Ala-Pro-OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc-β-Ala-Pro-OH；

S3、合成Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl：

在四氫呋喃中，Boc-β-Ala-Pro-OH、H-Dab(Boc)-NHBzl、HOBT、EDCI反應(yīng)得到Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl；

S4、合成類蛇毒三肽：

將Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl用三氟乙酸水溶液脫除Boc保護(hù)基，得到類蛇毒三肽粗品；

S5、類蛇毒三肽粗品純化：

類蛇毒三肽粗品經(jīng)粗品處理、高效液相色譜、陰離子交換色譜，得到高純類蛇毒三肽；其中，

所述類蛇毒三肽粗品純化過(guò)程中，陰離子交換色譜所用填料為改性聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色譜填料；

所述改性聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色譜填料是以聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球?yàn)榛|(zhì)，利用蘆竹堿對(duì)其進(jìn)行接枝改性，在表面形成一層蘆竹堿作為陰離子交換功能基團(tuán)制成，具體包括下述步驟：

1)單分散聚苯乙烯微球種子與鄰苯二甲酸二丁酯混合活化；

2)以甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯為單體，三聚氰酸三烯丙酯為交聯(lián)劑，乙醇水溶液為溶劑，加入活化后的單分散聚苯乙烯微球種子，在引發(fā)劑、穩(wěn)定劑、乳化劑的作用下發(fā)生聚合反應(yīng)制得聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球；

3)將聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球用甲苯水溶液中充分溶脹后，加入蘆竹堿反應(yīng)，抽濾，用水、丙酮和乙醇洗滌，干燥即得改性聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色譜填料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

步驟S1中，F(xiàn)moc-Dab(Boc)-OH、芐胺、NMM、EDCI的摩爾比為1:1.0～1.2:1.2～1.5:10～15；

步驟S2中，Boc-β-Ala-OH、H-Pro-Ome·HCl、NMM、HOBT、EDCI的摩爾比為1:0.9～1.2:0.9～1.2:1.0～1.2:1.0～1.2；

步驟S3中，HOBT、EDCI的添加摩爾量分別為Boc-β-Ala-Pro-OH摩爾量的0.1～0.14倍、10～12倍。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，粗品處理過(guò)程為：

將類蛇毒三肽粗品加入到含有少量三氟乙酸的雙蒸水中，用3.0～0.45μm的濾膜過(guò)濾，得到類蛇毒三肽粗品水溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，陰離子交換色譜過(guò)程中：

填料為改性聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色譜填料，流動(dòng)相為包含0.02～0.05vol%醋酸銨、0.5～2vol%醋酸的水溶液，流速為2～10mL/min，柱溫為30～45℃，收集乙酸型類蛇毒三肽溶液，減壓濃縮、冷凍干燥獲得高純類蛇毒三肽。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、三聚氰酸三烯丙酯的質(zhì)量比為1:0.15～0.3。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中，聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球、蘆竹堿的質(zhì)量比為1:0.6～1。

7.權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述所述方法制備得到的類蛇毒三肽在制備抗皺化妝品中的應(yīng)用，其特征在于，所述類蛇毒三肽的添加量為0.01～3％；

所述抗皺化妝品中還添加有四己基癸醇抗壞血酸酯、白花前胡醇；

所述四己基癸醇抗壞血酸酯的添加量為類蛇毒三肽質(zhì)量的0.3～0.5倍，白花前胡醇的添加量為類蛇毒三肽質(zhì)量的0.02～0.04倍。