[發(fā)明專利]一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法及裝置及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111502443.7
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN113999860B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉立明;陳磊;鄭濤
• 申請（專利權(quán)）人: 唐山曹妃甸天誠眾合環(huán)保科技有限公司
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N1/21;C12M1/38;C12M1/08;C12M1/10;C12M1/22;C12M1/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京君有知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11630
• 代理人: 焦麗雅

本發(fā)明公開了一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法及裝置及應(yīng)用，包括培養(yǎng)室以及安裝在所述培養(yǎng)室內(nèi)壁上的加熱片，所述培養(yǎng)室的內(nèi)部安裝有吹風(fēng)機構(gòu)，所述培養(yǎng)室內(nèi)部的上下兩側(cè)還分別安裝有放置機構(gòu)以及鼓風(fēng)機構(gòu)，所述培養(yǎng)室的一側(cè)安裝有出風(fēng)管，所述培養(yǎng)室的另一側(cè)安裝有進風(fēng)管，所述吹風(fēng)機構(gòu)包括固定連接在所述培養(yǎng)室內(nèi)壁側(cè)面的安裝板。本發(fā)明，既能夠增加培養(yǎng)裝置內(nèi)部的空氣流動，從而保證了培養(yǎng)裝置內(nèi)部各個角落的溫度均一致，而且可以實現(xiàn)放置在培養(yǎng)裝置內(nèi)部的培養(yǎng)皿進行不斷移動，從而保證了每個培養(yǎng)皿都能夠接觸同等的熱量、光照等，并且方便對培養(yǎng)裝置內(nèi)部的溫度進行調(diào)控，保證了工程菌處在最佳的培養(yǎng)狀態(tài)，因此提高了工程菌培養(yǎng)的質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及脫氮基因工程菌技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法，尤其還涉及一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)裝置及應(yīng)用。

背景技術(shù)

工程菌是采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)加工出來的新型微生物，具有多功能、高效和適應(yīng)性強等特點；工程菌通常采用培養(yǎng)裝置進行培養(yǎng)，而現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)裝置存在受熱不均勻，以及不便于對培養(yǎng)裝置內(nèi)部的溫度進行調(diào)控，從而導(dǎo)致工程菌受熱不均，進而影響工程菌的構(gòu)建的問題。

為此，我們提出一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法及裝置及應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上不足，提供一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法及裝置及應(yīng)用，既能夠增加培養(yǎng)裝置內(nèi)部的空氣流動，從而保證了培養(yǎng)裝置內(nèi)部各個角落的溫度均一致，而且可以實現(xiàn)放置在培養(yǎng)裝置內(nèi)部的培養(yǎng)皿進行不斷移動，從而保證了每個培養(yǎng)皿都能夠接觸同等的熱量、光照等，并且方便對培養(yǎng)裝置內(nèi)部的溫度進行調(diào)控，保證了工程菌處在最佳的培養(yǎng)狀態(tài)，因此提高了工程菌培養(yǎng)的質(zhì)量，來解決上述問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

S1、采集原位水水樣，制作DNA樣本，并通過培養(yǎng)設(shè)備進行培養(yǎng)；

S2、根據(jù)數(shù)據(jù)庫中報道的氨氧化細菌amo A基因序列設(shè)計簡并引物，以B.subtilis168DN作為宿主菌，構(gòu)建amo A基因文庫，通過高通量方法初步篩選高活性的amo A基因，再通過復(fù)篩和分子手段(采用通用引物以及特異性引物進行菌落PCR驗證)進一步對初篩菌株的amo A活性進行驗證；

S3、HAO、NOS基因同上；

S4、以B.subtilis 168DN作為宿主菌，將篩選到的amo A基因、hao基因、nos基因共表達；

S5、將宏基因文庫和基因突變基因技術(shù)應(yīng)用于氨氧化酶工程菌的構(gòu)建，即另采用易錯PCR方法，提高突變譜的多樣性，篩選高活性氨氧化酶突變基因，后將AMO-HAO-NOS三種基因進行串聯(lián)，構(gòu)建高活性氨氧化工程菌。

本發(fā)明還提供了一種脫氮基因工程菌的培養(yǎng)裝置，包括上述所述的培養(yǎng)設(shè)備，所述培養(yǎng)設(shè)備包括培養(yǎng)室以及安裝在所述培養(yǎng)室內(nèi)壁上的加熱片，所述培養(yǎng)室的內(nèi)部安裝有吹風(fēng)機構(gòu)，所述培養(yǎng)室內(nèi)部的上下兩側(cè)還分別安裝有放置機構(gòu)以及鼓風(fēng)機構(gòu)，所述培養(yǎng)室的一側(cè)安裝有出風(fēng)管，所述培養(yǎng)室的另一側(cè)安裝有進風(fēng)管；

其中，所述吹風(fēng)機構(gòu)包括固定連接在所述培養(yǎng)室內(nèi)壁側(cè)面的安裝板，所述安裝板的側(cè)面固定連接有對稱設(shè)置的連接彈簧，兩個所述連接彈簧的另一端通過復(fù)位板固定連接，所述復(fù)位板的頂部固定連接有吹風(fēng)機，所述培養(yǎng)室的側(cè)面還固定連接有安裝架，所述安裝架上固定連接有伺服電機，且所述伺服電機的輸出軸活動貫穿所述安裝架設(shè)置，所述伺服電機的輸出軸上固定連接有收卷輥，所述收卷輥上纏繞設(shè)置有拉繩，所述拉繩遠離所述收卷輥的一端與所述復(fù)位板側(cè)面的中心處固定連接；

其中，所述放置機構(gòu)由旋轉(zhuǎn)組件以及等距離安裝在所述旋轉(zhuǎn)組件上的若干個放置組件構(gòu)成；