[發明專利]一種廣譜性狂犬病病毒樣顆粒抗原的設計及其穩定表達細胞株HEK-293

在審

• 申請號: 202111469929.5
• 申請日: 2021-12-03
• 公開（公告）號: CN114262365A
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 馬興元;趙章婷;鄭文云;鄧昌平
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C07K14/145
• 分類號: C07K14/145;C12N15/85;C12N15/47;C12N15/65;C12N5/10;A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 李鴻儒

本發明先利用CVS株狂犬病病毒RABV的糖蛋白RVGP和基質蛋白RVMP自組裝成的RVLPs為抗原，設計一種廣譜性狂犬病病毒樣顆粒抗原；然后將RVGP、RVMP和EGFP共同構建到真核表達載體pcDNA3.1(+)中，命名為pcDNA3.1(+)?RVLPs?EGFP。每個蛋白都具有獨立的啟動子(CMV)、核糖體結合位點(Kozak序列)和PloyA尾(PA)，以保證每個蛋白的表水平，同時利用EGFP實時監測目的蛋白的表達，構建真核重組表達質粒；而后將真核重組表達質粒轉染HEK?293細胞，細胞經擴增和傳代后，進行篩選和鑒定，篩選得到穩定高效表達RVLPs的陽性單克隆細胞株HEK?293/RVLPs。獲得抗原具有哺乳動物細胞的翻譯后修飾，克服了細菌、酵母、昆蟲以及植物細胞來源的RVLPs由于糖基化修飾不正確而表現出低免疫原性，為RVLPs抗原的規模化生產奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于疫苗技術領域，具體涉及一種廣譜性狂犬病病毒樣顆粒(RVLPs)抗原的設計 及其穩定表達細胞株HEK-293的篩選和鑒定。

背景技術

狂犬病(Rabies)是一種古老的且最容易被忽略的人畜共患病，主要由致死性病原體 ——狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引發(Zhao R Q,Shan Y,Li M H,et al.NovelStrategy for Expression and Characterization of Rabies Virus Glycoprotein[J].Protein Expression and Purification,2020,168:105567.Liu,Zhao W,He W T,etal.Generation of Monoclonal Antibodies against Variable Epitopes of the MProtein of Rabies Virus[J].Viruses,2019,11(4).)。 犬類是RABV最主要的宿主，超過99％的人類狂犬病是由狗介導的(Navid M T,Li YY, Zhou M,et al.Comparison of theImmunogenicity of Two Inactivated Recombinant Rabies Viruses Overexpressingthe Glycoprotein[J].Archives of Virology,2016,161(10):2863-2870.)， 其唾液中的RABV通過傷口處的皮膚或黏膜經突觸擴散到周圍神經，并逆行至中樞神經 系統(Centralnervous system,CNS)，在大腦中快速復制并導致腦損傷，致亡率幾乎 100％(Johnsona N,Cunningham A F,Fooks A R.The Immune Response to Rabies Virus Infection andVaccination[J].Vaccine,2010,28(23):3896-3901.)。