[發明專利]降低抗人胸腺基質淋巴細胞生成素單克隆抗體生產中宿主細胞蛋白含量的親和純化方法

有效

• 申請號: 202111455042.0
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN114605536B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 戴長松;李帥;朱華杰;戴璐;唐宇杰;李夢茹;何勇梅;吳亦亮
• 申請（專利權）人: 江蘇荃信生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C07K1/22
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產權代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

1.一種降低抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體生產中宿主細胞蛋白含量的親和純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

制備抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體的發酵液；

將第一緩沖溶液和親和層析介質混合，從而得到平衡好的親和層析介質，然后將所述抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體的發酵液與所述平衡好的親和層析介質混合，得到混合溶液；

將所述混合溶液進行第一次洗脫，接著進行第二次洗脫，從而除去宿主細胞蛋白，得到抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體；

所述抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體包含三個重鏈互補決定區CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3和三個輕鏈互補決定區CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3，其中：

CDR-H1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；

CDR-H2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

CDR-H3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；

CDR-L1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；

CDR-L2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：5所示；

CDR-L3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

2.根據權利要求1所述的親和純化方法，其特征在于，所述抗人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）單克隆抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，

所述重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：7所示；

所述輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：8所示。

3.根據權利要求1或2所述的親和純化方法，其特征在于，所述親和層析介質選自配基交聯到瓊脂糖、聚乙烯醚、羥基化聚醚樹脂、聚丙烯酸樹脂、聚苯乙烯二乙烯苯基樹脂、聚甲基丙烯酸樹脂、聚苯乙烯樹脂、羥基磷灰石或玻璃基質上的層析介質中的一種。

4.根據權利要求3所述的親和純化方法，其特征在于，所述親和層析介質為配基交聯到聚乙烯醚的層析介質。

5.?根據權利要求3所述的親和純化方法，其特征在于，所述配基為Protein?A、ProteinG或Protein?L。

6.?根據權利要求3所述的親和純化方法，其特征在于，所述配基為Protein?A。

7.根據權利要求1或2所述的親和純化方法，其特征在于，所述第一緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液或硼酸-硼砂緩沖液中的一種，所述第一緩沖溶液中的鹽濃度為5mM-0.25M，pH為5.5-8.0。

8.根據權利要求1或2所述的親和純化方法，其特征在于，所述混合溶液進行第一次洗脫時，采用第一次洗脫溶液進行洗脫；

所述第一次洗脫溶液為中性緩沖液或酸性緩沖液。

9.根據權利要求8所述的親和純化方法，其特征在于，所述中性緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液或甘氨酸緩沖液中的一種。

10.根據權利要求8所述的親和純化方法，其特征在于，所述酸性緩沖液選自檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液或檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液中的一種。

11.根據權利要求8所述的親和純化方法，其特征在于，所述第一次洗脫溶液的pH為5.0-7.5。

12.根據權利要求8所述的親和純化方法，其特征在于，在所述第一次洗脫溶液中加入預洗脫活性劑；

所述預洗脫活性劑選自鹽酸胍、聚山梨酯80或氯化鈉中的一種。

13.根據權利要求12所述的親和純化方法，其特征在于，所述預洗脫活性劑為鹽酸胍。