[發明專利]BMMSCs的應用及治療妊娠相關靜脈血栓栓塞癥的藥物試劑盒

在審

• 申請號: 202111407623.7
• 申請日: 2021-11-24
• 公開（公告）號: CN114028427A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 張玉泉;成曦;張沐;孫寶蘭;謝園園;杜蓉;徐艷華
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P7/02
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 曹振中

1.一種BMMSCs的應用，其特征在于：用于制備治療妊娠相關靜脈血栓栓塞癥的藥物。

2.一種治療妊娠相關靜脈血栓栓塞癥的藥物試劑盒，其特征在于：包含BMMSCs。

3.根據權利要求2上述的治療妊娠相關靜脈血栓栓塞癥的藥物試劑盒，其特征在于：還包括PBS溶液。

4.一種BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：包含以下步驟：

S1：分離、培養、鑒定骨髓間充質干細胞；

S2：構建SD孕鼠深靜脈血栓模型；

S3：分組實驗：隨機將30只10周齡200-250g懷孕11天的SD孕鼠分為5組，每組6只，其中包括A組：假手術組，B組：DVT+PBS，C組：DVT+BMMSCs（一次），D組：DVT+BMMSCs（兩次），E組：DVT+BMMSCs（三次）組；

S4：效果分析：包括血栓大小評估、血管生成評估及妊娠結局分析。

5.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述S1中通過誘導成骨和成脂實驗鑒定細胞的多向分化能力。

6.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述S2中通過數字化減影血管造影驗證模型構建是否成功。

7.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述S3中使用攜帶綠色熒光蛋白標記的慢病毒感染BMMSCs，并使用嘌呤霉素篩選穩轉株，使用流式細胞術鑒定慢病毒轉染效率；通過生物活體成像觀察接受GFP-BMMSCs移植的DVT孕鼠中干細胞定位，并通過HE染色觀察血栓部位有無干細胞定植。

8.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述血栓大小評估具體包含以下步驟：觀察下腔靜脈內血栓形成情況，使用游標卡尺原位測定血栓長度（mm）；將剝離動脈及附屬組織筋膜的靜脈及血栓使用電子天平進行稱重（g）。

9.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述血管生成評估具體包含以下步驟：將4%多聚甲醛中固定的下腔靜脈內皮及其包裹血栓進行脫水、透明、浸蠟、包埋，制成3-4微米的玻片標本；使用內皮細胞標記CD34進行免疫組化染色，計算各組CD34陽性血管數，分析各組血管形成情況。

10.根據權利要求4所述的BMMSCs移植的驗證方法，其特征在于：所述妊娠結局分析具體包含以下步驟：通過計算胚胎吸收率（被吸收胚胎數和總胚胎數的比值）分析BMMSCs移植是否能改善妊娠結局。