[發明專利]一種KL-6測定試劑盒及其制備與檢測方法

有效

• 申請號: 202111405946.2
• 申請日: 2021-11-24
• 公開（公告）號: CN114137204B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 芮雙印;劉怡萌
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/539
• 分類號: G01N33/539;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 李靜

1.?一種KL-6測定試劑盒，其特征在于，包括樣本預處理試劑和膠乳試劑；所述樣本預處理試劑包括：pH?7.3的磷酸鹽緩沖液10mmol/L，甘油5g/L，疊氮鈉1g/L，PEG?6000?10g/L；所述膠乳試劑包括：pH?7.3的甘氨酸緩沖液50mmol/L，BSA?0.5~2g/L，Proclin300?1g/L，抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒30mg/L；其中，所述抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒中的乳膠顆粒采用粒徑分別為150nm、180nm的兩種不同粒徑的乳膠顆粒，抗人KL-6抗體采用鼠抗人KL-6單克隆抗體；

所述抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒的具體制備方法如下：

①取粒徑為150nm的膠乳微球1mL與粒徑為180nm的膠乳微球1mL進行混合，得混合微球；接著，再將緩沖液A與混合微球按體積比1：3進行混合；其中，緩沖液A采用80mmol/L硼酸緩沖液，pH?6；

②加入0.6mL活化劑，混勻，并置于恒溫搖床中反應25min，溫度37°C；其中，活化劑包括：NHS?25mg/mL，EDC?9.0mg/mL，現配現用；

③加入緩沖液B，調整膠乳溶液的pH值至7.2；其中，緩沖液B采用80mmol/L硼酸鈉緩沖液；

④加入2mg抗人KL-6抗體，混勻，并置于恒溫搖床中反應2.5h，溫度37°C；

⑤加入1.5mL封閉液，混勻，并置于恒溫搖床中反應1.5h，溫度37°C；其中，封閉液包括：BSA?10g/L，procline-300?1ml/L；

⑥反應完成后離心，離心轉速16000rpm，離心時間40?min；

⑦離心完成后，去除上清液，即得目標所需的抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒。

2.一種如權利要求1所述的KL-6測定試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）配制樣本預處理試劑：

按照樣本預處理試劑的組分含量，將各組分于同一容器中混合，混合均勻后，制得樣本預處理試劑；

（2）制備抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒：

①取粒徑為150nm的膠乳微球1mL與粒徑為180nm的膠乳微球1mL進行混合，得混合微球；接著，再將緩沖液A與混合微球按體積比1：3進行混合；其中，緩沖液A采用80mmol/L硼酸緩沖液，pH?6；

②加入0.6mL的活化劑，混勻，并置于恒溫搖床中反應25min，溫度37°C；其中，活化劑包括：NHS?25mg/mL，EDC?9.0mg/mL；

③加入緩沖液B，調整膠乳溶液的pH值至7.2；其中，緩沖液B采用80mmol/L硼酸鈉緩沖液；

④加入2mg抗人KL-6抗體，混勻，并置于恒溫搖床中反應2.5h，溫度37°C；

⑤加入1.5mL封閉液，混勻，并置于恒溫搖床中反應1.5h，溫度37°C；其中，封閉液包括：BSA?10g/L，procline-300?1ml/L；

⑥反應完成后離心，離心轉速16000rpm，離心時間40min；

⑦離心完成后，去除上清液，即得目標所需的抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒；

（3）配制膠乳試劑：

①按照膠乳試劑的組分含量，將甘氨酸緩沖液、BSA與Proclin300混合制成微球稀釋液；

②用稀釋液重懸步驟（2）制得的抗人KL-6抗體混合乳膠顆粒，重懸過程中使用細胞破碎儀輔助重懸，最終制得獲得的混合液即為目標所需的膠乳試劑。