[發(fā)明專利]環(huán)境污染中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111400904.X
• 申請日: 2021-11-19
• 公開（公告）號: CN114199838A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李娜;馬梅;韓穎楠
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

1.一種環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

提供對數(shù)期的細(xì)胞，所述細(xì)胞包含雌激素膜受體；

將所述細(xì)胞置于添加有待測環(huán)境污染物和熒光標(biāo)記的雌激素的無酚紅完全培養(yǎng)基中進(jìn)行暴露試驗，檢測所述暴露試驗的初始熒光強度；

所述暴露試驗結(jié)束，將所述完全培養(yǎng)基換成細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液，檢測所述暴露試驗的終止熒光強度；

根據(jù)所述初始熒光強度和所述終止熒光強度的差值實現(xiàn)所述環(huán)境污染物中所述環(huán)境雌激素干擾物的定性檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述暴露試驗的時長為0.5小時-1.5小時。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述熒光標(biāo)記的雌激素的濃度為10^-5mol/L-10^-7mol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述待測環(huán)境污染物的濃度以對所述細(xì)胞的細(xì)胞急性毒性＜10％計。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述暴露試驗采用的細(xì)胞密度為1×10⁵個/mL-2×10⁵個/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述細(xì)胞包含SKBR3細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述雌激素包含環(huán)境中的雌二醇、雙酚A和壬基酚中的一種或者多種；

或/和，所述細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液包含磷酸鹽緩沖液和TRIS緩沖液中的一種或者兩種；

或/和，熒光標(biāo)記采用熒光染料包含異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、羥基熒光素和四氯熒光素中的一種或者多種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，檢測所述初始熒光強度和所述終止熒光強度的吸收光波長為490nm-495nm、發(fā)射光波長為520nm-530nm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述暴露試驗在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的環(huán)境污染物中環(huán)境雌激素干擾物的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括制備熒光標(biāo)記的雌激素的梯度濃度溶液、繪制熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線并根據(jù)所述熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線對所述環(huán)境雌激素干擾物進(jìn)行半定量檢測的步驟。