[發(fā)明專利]高活性高穩(wěn)定性益生菌規(guī)模化制備技術(shù)開發(fā)與示范

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111384188.0
• 申請日: 2021-11-19
• 公開（公告）號: CN114107066A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設計）人: 黃煒乾;方文棋;張泳;蔣順進;張文;林萬華;林昊;黃欽耿
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東容大生物股份有限公司;清遠一生自然生物研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/20;C12N1/04;C12N1/36;C12N1/38
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;郝傳鑫

1.高活性高穩(wěn)定性益生菌規(guī)模化制備技術(shù)開發(fā)與示范，其特征在于，包括以下內(nèi)容：

第一步：選擇不同代表性的益生菌3—5株，建立發(fā)酵工藝，實現(xiàn)發(fā)酵液中益生菌活菌數(shù)達到100—300億CFU/ml；

第二步：開發(fā)適用于益生菌冷凍干燥過程的保護劑并建立相關(guān)工藝，實現(xiàn)冷凍干燥制品中活菌數(shù)達到5000-8000億CFU/克，常溫(25度)儲存12個月存活率不低于60％；

第三步：開發(fā)適用于益生菌低熱噴霧干燥技術(shù)的保護劑并建立相關(guān)工藝，實現(xiàn)低熱噴霧干燥制品中活菌數(shù)達到4000-6000億CFU/克，常溫(25度)儲存12個月存活率不低于50％；

第四步：建立益生菌規(guī)模化制備示范生產(chǎn)線；

第五步：建立益生菌制備以及加工過程品質(zhì)控制技術(shù)體系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高活性高穩(wěn)定性益生菌規(guī)模化制備技術(shù)開發(fā)與示范，其特征在于：所述高活性高穩(wěn)定性益生菌規(guī)模化制備技術(shù)包括以下內(nèi)容：益生菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)；發(fā)酵完成后的菌體冷凍干燥保護劑和保護技術(shù)；低熱噴霧干燥保護劑和保護技術(shù)；微膠囊保護技術(shù)；品質(zhì)控制技術(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高活性高穩(wěn)定性益生菌規(guī)模化制備技術(shù)開發(fā)與示范，其特征在于：所述益生菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)包括以下內(nèi)容：

第一步：高活性、高穩(wěn)定性的功能益生菌株的馴化選育；

通過室溫常壓等離子體誘變(ARTP)與原生質(zhì)體融合技術(shù)對不同功能益生菌進行“雜交”，結(jié)合底物、產(chǎn)物、膽鹽、酸堿度等的耐受馴化，選育抗逆能力強、代謝旺盛，而且可以耐受和利用高濃度底物和自身產(chǎn)物的優(yōu)良菌株，從源頭確保功能益生菌的強勢；

第二步：種子強化工藝的建立；

發(fā)酵生產(chǎn)的結(jié)果受制于菌種的質(zhì)量、菌種過老、傳代級數(shù)過多，使得菌種的高效表達及終產(chǎn)物的積累受阻，主要表現(xiàn)在難以控制有效成份的生物合成，也會造成無效成份的積累增加，進而影響發(fā)酵全過程。強化種子工藝的關(guān)鍵技術(shù)在于提高菌種的活力，增強菌株同步性，使其整體“年輕化”，種子強化工藝，對益生菌或活性產(chǎn)物的的大量積累來說非常必要；

第三步：發(fā)酵培養(yǎng)基及工藝優(yōu)化；

根據(jù)不同益生菌的生長及代謝特性，通過單因素和多因素的組合方式考察碳源(碳源種類和碳源濃度)、氮源(氮源種類巧氮源濃度)、無機鹽等對益生菌生長和代謝的影響，特別考察氨基酸(蛋氨酸和精氨酸等)和B族維生素類作為促生長因子的可能性，工藝控制方面，實行多重網(wǎng)絡代謝控制和工藝調(diào)控，以殘?zhí)恰⑷苎?DO)、pH控制為主要對象，通過流加補料(主要為葡萄糖和氨水)的方式，調(diào)節(jié)功能菌株生長與代謝的關(guān)系，并逐級放大，最終實現(xiàn)細胞的高密度發(fā)酵與活性產(chǎn)物相結(jié)合。