[發明專利]一種牙髓干細胞培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 202111364286.8
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN113846057A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 賀函;羅強輝
• 申請（專利權）人: 賀函
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種牙髓干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，添加劑由以下原料組成：胰島素、卟啉、金納米棒、苦參素、小球藻生長因子、黃體酮、亞硒酸鈉、谷氨酰胺。培養基中添加苦參素和小球藻生長因子可以促進細胞進行有絲分裂，提高細胞增殖活性，顯著提高牙髓干細胞的增殖速度，減少細胞老化，在短時間內實現牙髓干細胞的大量擴增。添加金納米棒增加了牙髓干細胞的貼壁性，提高細胞增殖過程的穩定性，有助于細胞保持活性。上述成分協同作用可在段時間內實現牙髓干細胞的大量擴增，為牙髓干細胞的科研及臨床應用提供保障。本發明還提供了一種牙髓干細胞培養基的制備方法，在基礎培養基中添加添加劑各成分制備得到，過程簡便，易于操作。

技術領域

本發明涉及干細胞領域，尤其涉及一種牙髓干細胞培養基及其制備方法。

背景技術

干細胞是一種能不斷自我更新，具有多種發育潛能，存在于胚胎、成體器 官或組織中的未分化或分化程度很低的細胞。牙髓干細胞作為間充質干細胞的一種類型，是從成人的牙齒的牙髓組織中，分離出來的一種成體干細胞。牙髓干細胞是一種具有高度增殖和多向分化能力的間充質干細胞。牙髓干細胞除了在牙科組織工程中具有良好的應用前景，還被廣泛應用在再生醫療領域。相比于胚胎干細胞，牙髓干細胞沒有倫理的問題，也沒有免疫排斥，不存在致瘤性等問題。所以牙髓干細胞是一種很好的潛在的臨床應用細胞材料。

原代培養的牙髓干細胞多來自于智齒或者因正畸需要拔除的年輕恒牙，盡管牙間充質干細胞來源廣泛，但單個個體獲取的原代干細胞數量有限，牙髓中干細胞含量較低，很難滿足臨床細胞治療對細胞數量的需求。因此，體外大規模的擴增培養以獲得足夠的細胞數量是牙髓干細胞臨床應用的前提。目前牙髓干細胞培養體系主要采用含動物源胎牛血清的培養基，動物源胎牛血清在一定程度上有可能引起人體免疫排斥反應，增加了牙髓干細胞臨床應用的風險。部分牙髓干細胞培養基不添加胎牛血清，但是選擇添加人AB血清，如專利201710596515.6中添加了5%-10%的人AB血清，人AB血清為采用AB血型正常人血液為原料，經無菌采集、分離、微孔過濾后而成。因原料來自人血，雖然對原料血漿進行了相關病原體的篩查，并在生產工藝中加入了去除和滅活病毒的措施，但理論上仍存在傳播某些已知和未知病原體的潛在風險，臨床使用時應權衡利弊。因此研究一種不添加外源性血清且成分明確的牙髓干細胞培養基很有必要。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于本發明提供一種牙髓干細胞培養基，成分安全，不添加外源血清，對牙髓干細胞的增殖有明顯的促進作用。

本發明的目的之二在于提供一種牙髓干細胞培養基的制備方法。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種牙髓干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，所述添加劑由以下原料組成：胰島素、卟啉、金納米棒、苦參素、小球藻生長因子、黃體酮、亞硒酸鈉、谷氨酰胺。

進一步地，所述添加劑各組分的終濃度為：胰島素1-5μg/mL、卟啉1.8-2.5ng/mL、金納米棒2.2-3.5ng/mL、苦參素8.5-10.5ng/mL、小球藻生長因子5.3-7.8 ng/mL、黃體酮5.0-7.5μg/mL、亞硒酸鈉2-5μg/mL、谷氨酰胺5-10μg/mL、。

進一步地，所述添加劑中各組分的終濃度為：胰島素3μg/mL、卟啉2.2ng/mL、金納米棒3ng/mL、苦參素9.2ng/mL、小球藻生長因子6.4ng/mL、黃體酮6μg/mL、亞硒酸鈉3.5μg/mL、谷氨酰胺8μg/mL、。

進一步地，所述基礎培養基為α-MEM培養基。

本發明的目的之二采用如下技術方案實現：

上述牙髓干細胞培養基的制備方法，包括以下步驟：取α-MEM培養基加入苦參素、金納米棒、小球藻生長因子、卟啉、黃體酮、亞硒酸鈉、谷氨酰胺、胰島素，攪拌均勻，經濾膜過濾除菌，得到牙髓干細胞培養基。

進一步地，采用0.22μm的濾膜過濾除菌。