[發明專利]煙草廢棄物水提液中多糖的提取方法及其應用

有效

• 申請號: 202111293361.6
• 申請日: 2021-11-03
• 公開（公告）號: CN113943379B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 鐘衛鴻;金維華;陳穎;何新月
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 趙芳

本發明公開了煙草廢棄物水提液中多糖的提取方法及其在抑制腫瘤細胞中的應用，提取方法包括制備粗多糖、脫色、層析純化，前述多糖可應用于抑制人非小細胞肺癌細胞A549。本發明能夠很好地提取、分離、純化煙草廢棄物水提液中的多糖，并能對A549取得良好的抑制效果。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，特別涉及到煙草廢棄物水提液中多糖的提取、分離純化方法及活性探究。

背景技術

在造紙法再造煙葉的工藝流程中，使用水浸提煙草廢棄物，經過固液分離、薄膜濃縮獲得了高濃度煙草廢棄物水提液(Tobacco waste extract，TWE)，是造紙法再造煙葉一種十分重要的中間產物。TWE這種高濃度的水提取液，含有大量的煙草內源水溶性化合物，密度為1.3g/cm³，pH值為4，還原糖含量為163.8g/L，尼古丁含量為19.5g/L(根據具體的工藝及煙草原料，其具體數值會有些變化)，可知TWE中的糖含量極高。

作為一種植物多糖，可能像大多數由醛糖或酮糖縮合而成的天然高分子聚合物一樣，具有降血糖降血脂、抗氧化、增強免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抑菌等功能活性，從而在藥品、食品、保健品、護膚品等方面獲得應用。然而，迄今對于煙草多糖的研究主要致力于提高卷煙的感官質量，而對其活性尤其是抗腫瘤方面的研究應用較少。

發明內容

本發明的目的是從TWE原液中提取得到多糖，并研究其在抑制腫瘤中的應用。

為此，本發明采用的技術方案是這樣的：

煙草廢棄物水提液中多糖的提取方法，包括下述步驟：

1)粗多糖制備

1.1)量取煙草廢棄物水提液，加入等比例的蒸餾水，8000rpm離心20min；

1.2)將上清液邊攪拌邊倒入4倍體積的無水乙醇中，保鮮膜封口，室溫醇沉過夜；

1.3)倒掉上清，保留沉淀，加入蒸餾水復溶，得到粗多糖溶液。

進一步地，還包括下述步驟：

2)將粗多糖溶液置于燒杯中，用氫氧化鈉溶液調pH至9.0，逐滴加入30％H₂O₂并攪拌，30％H₂O₂用量為10％，60℃水浴攪拌3h，冷卻靜置，抽濾，保留濾液；

或者采用這樣的步驟：

2)往粗多糖溶液中加入質量比50％的AB-8大孔吸附樹脂，放入30℃、180rpm的搖床振蕩4h，抽濾，保留濾液；

又或者采用這樣的步驟：

2)往粗多糖溶液中加入質量比50％的AB-8大孔吸附樹脂，放入30℃、180rpm的搖床振蕩4h，抽濾，保留AB-8大孔吸附樹脂，加入50％乙醇，放入30℃、180rpm的搖床中振蕩4h，抽濾，保留濾液。

更進一步地，還包括下述步驟：

3)粗多糖層析純化

3.1)將上步所得的粗多糖溶液透析凍干；

3.2)稱取上步所得多糖，溶于兩倍質量的蒸餾水中，1000rpm離心2min，取上清液均勻滴加到DEAE-Sepharose FF離子柱上表面，采用非梯度洗脫的方法分離純化TWE多糖；

3.3)用苯酚-硫酸法檢測流出液是否含糖并收集含糖組分，旋蒸濃縮，冷凍干燥，然后用蒸餾水或NaCl溶液洗脫。

本發明的另一個技術方案是這樣的：

前述多糖應用于抑制腫瘤細胞。

具體地，前述多糖應用于抑制人非小細胞肺癌細胞A549。