[發(fā)明專利]一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒及鑒定方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111290686.9 | 申請日： | 2021-11-02 |
| 公開（公告）號： | CN113999920A | 公開（公告）日： | 2022-02-01 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張煒;厲從志;王卓昊;鄭祥寬 | 申請（專利權）人： | 南京悅聯(lián)生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6858;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210000 江蘇省南京市雨花臺區(qū)*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種禽 致病性 大腸桿菌 三重 pcr 鑒定 試劑盒 方法 | ||
1.一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒，其特征在于：包括用于特異性擴增的3種血清型的禽致病性大腸桿菌基因序列的引物對組合，其中，所述的3種血清型的APEC菌株分別為EC164、EC165、EC168。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒，其特征在于：所述用于特異性擴增O2型莢膜基因的引物對分別具有SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；
用于特異性擴增O78型莢膜基因的引物對分別具有SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；
用于特異性擴增O145型莢膜基因的引物對分別具有SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒，其特征在于：所述PCR試劑盒包括2×RapidTaqMasterMix（withddH2O）。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒，其特征在于：所述PCR試劑盒包括3種血清型的陽性對照樣本。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒及鑒定方法，其特征在于：所述3種禽致病性大腸桿菌為EC164滅活菌液（O78陽性對照）、EC165（O2陽性對照）、EC168（O145陽性對照）。
6.根據(jù)權利要求4所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒的鑒定方法，其特征在于：該鑒定方法包括以下步驟：
S1：獲取待檢測菌株的純培養(yǎng)物，得到菌液；
S2：利用權力要求2、3中所述的PCR試劑盒，對步驟S1中的菌液純培養(yǎng)物進行多重PCR；
S3：對步驟S2的PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)條帶大小確定待檢測APEC的血清型。
7.根據(jù)權利要求6所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒的鑒定方法，其特征在于：所述步驟S2中PCR反應體系為：2μL核酸反應模板，12.5μL2×RapidTaqMasterMix，1μL上游引物，1μL下游引物，加入ddH2O補齊至25μL。
8.根據(jù)權利要求7所述的一種禽致病性大腸桿菌三重PCR鑒定試劑盒的鑒定方法，其特征在于：所述步驟S2中PCR反應程序為：95℃5min；95℃15s、55℃15s、72℃30s，30個循環(huán)；72℃7min。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于南京悅聯(lián)生物科技有限公司，未經(jīng)南京悅聯(lián)生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權和技術合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202111290686.9/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
