[發明專利]一種完全殺滅燦爛弧菌的方法

有效

• 申請號: 202111282498.1
• 申請日: 2021-11-01
• 公開（公告）號: CN114097786B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 張衛衛;姜國華;李成華;李亞楠
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: A01N37/44
• 分類號: A01N37/44;A01P1/00;C12N1/20;C12R1/63
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 何仲

本發明公開了一種完全殺滅燦爛弧菌的方法，特點是在含有燦爛弧菌的菌液中添加特定碳源，同時加入四環素，共孵育4?6小時，即可完全殺滅燦爛弧菌，其中特定碳源為D?葡萄糖、L?谷氨酸、L?苯丙氨酸和L?天冬氨酸中的至少一種，聯用的抗生素為四環素；濃度為15?mM的D?葡萄糖、10?mM的L?谷氨酸、40?mM的L?苯丙氨酸和5?mM的L?天冬氨酸和400μg/mL的四環素能夠達到完全殺滅燦爛弧菌的效果，優點是可對燦爛弧菌進行完全的清除，高效、簡單方便且安全，有望在燦爛弧菌清除中發揮重要作用。

技術領域

本發明涉及一種殺滅燦爛弧菌的方法，尤其是涉及一種完全殺滅燦爛弧菌的方法。

背景技術

燦爛弧菌是海水中普遍存在的細菌，是多種海水養殖動物的病原，可感染魚、貝和海參等多種經濟養殖動物，造成嚴重的經濟損失。例如，燦爛弧菌可感染刺參導致腐皮綜合征的發生，造成大規模的刺參死亡，死亡率可高達90%以上。使用抗生素是殺滅病原菌的有效手段，但是在使用抗生素處理病原菌時，在多數情況下不能殺滅全部的病原菌，在細菌菌群中總有一小部分菌體在施用抗生素后仍然存活。這是因為，在面臨抗生素等不利環境時，菌體會通過減少自身代謝活性以降低對能量的需求，甚至進入休眠狀態，以對抗環境不利因素。但是，這部分沒有被抗生素殺滅的菌體可作為種子，在環境適宜菌體生長時重新復蘇為活躍的致病菌，引起疾病的再次感染。因此，單純使用抗生素難以殺滅全部的病原菌。

目前，殺滅病原菌的主要方法有使用抗生素、中草藥、對病原具有拮抗活性的益生菌和“抗毒力”的生物制劑等生物活性物質。迄今為止已經報道的能抑制和殺滅燦爛弧菌的方法包括使用卡那霉素、氯霉素、中草藥黃連、連翹、黃芩、黃柏、及噬菌體等生物制劑。其中使用抗生素殺滅病原菌的方法的主要缺點為在同步培養物中，使用抗生素殺滅病原菌會殘存一小部分對抗生素具有耐受的菌體，占菌體比例小于1%。這一小部分菌體在抗生素壓力解除后，遇到適宜的環境條件，會再次復蘇為代謝活躍的菌體，并恢復其感染能力。使用具有拮抗活性的微生物進行病原菌抑制的主要缺點在于拮抗微生物依然是極具活力的微生物，因此，將其施加于環境中，其生物安全性難以確保。使用中草藥亦可達到對病原菌的殺滅，但是中草藥具有極高的經濟價值，將其用于水產養殖病害的防治具有極低的性價比和可行性。因此，水產養殖的病害防治亟需病原殺滅效率高、可行性高和投入成本低的技術手段。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高效、簡單可行且安全的完全殺滅水產養殖重要病原菌燦爛弧菌的方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種完全殺滅燦爛弧菌的方法，在含有燦爛弧菌的菌液中添加特定碳源，同時加入四環素，共孵育4-6小時，即可完全殺滅燦爛弧菌。

進一步，所述的特定碳源包括D-葡萄糖、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸和L-天冬氨酸中的至少一種。

進一步，所述的特定碳源中L?-天冬氨酸的最低終濃度為5?mM。

進一步，所述的特定碳源中L?-谷氨酸的最低終濃度為10?mM。

進一步，述的特定碳源中D?-葡萄糖的最低終濃度為15mM。

進一步，所述的特定碳源中L?-苯丙氨酸的最低終濃度為40?mM。

進一步，所述的四環素的最低終濃度為400?μg/mL。

一種燦爛弧菌的抑制劑，由特定碳源和四環素組成，所述的特定碳源包括D-葡萄糖、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸和L-天冬氨酸中的至少一種。

進一步，所述的L?-天冬氨酸在含有燦爛弧菌的菌液中的最低終濃度為5?mM，所述的L?-谷氨酸在含有燦爛弧菌的菌液中的最低終濃度為10?mM，所述的D?-葡萄糖在含有燦爛弧菌的菌液中的最低終濃度為15mM，所述的L?-苯丙氨酸在含有燦爛弧菌的菌液中的最低終濃度為40?mM，所述的四環素在含有燦爛弧菌的菌液中的最低終濃度為400?μg/mL。