[發明專利]多肽組合物、T淋巴細胞以及其在抗腫瘤細胞中的應用

在審

• 申請號: 202111245473.4
• 申請日: 2021-10-26
• 公開（公告）號: CN113943347A
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 李坤鵬
• 申請（專利權）人: 維肽瀛（上海）生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/00;C12N5/0783;C12N5/0784;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 南昌合達信知識產權代理事務所(普通合伙) 36142
• 代理人: 李旦

1.一種抑制腫瘤的多肽組合物，包括如下序列的3條多肽：

QCKTCQVLEHVVRVNARVRIRKF，如SEQ ID NO.1所示；

SDELVRHHNVLEH，如SEQ ID NO.2所示；

HHNMHQRNMVLEHVV，如SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的多肽組合物，還包括如下序列的2條多肽：

NLMQYTSQL，如SEQ ID NO.4所示；

KRMFKLSHLQYHSRKH，如SEQ ID NO.5所示。

3.一種T淋巴細胞，由權利要求1或2所述的多肽組合物誘導產生。

4.根據權利去3所述的T淋巴細胞，其制備過程包括：

獲得純化的外周血單核細胞，所述外周血單核細胞表達HLA-A*0201基因；

獲得載肽DC細胞，所述載肽DC細胞由所述外周血單核細胞誘導制得的DC細胞負載如SEQ ID NO.1～3所示的多肽組合物或如SEQ ID NO.1～5所示的多肽組合物制得；

獲得所述T淋巴細胞，所述T淋巴細胞由所述載肽DC細胞和所述DC細胞共培養制得，所述T淋巴細胞為細胞毒性T淋巴細胞。

5.根據權利要求4所述的T淋巴細胞，獲得所述細胞毒性T淋巴細胞的步驟具體包括：

以所述DC細胞為CTLs前體細胞與所述載肽DC細胞以數量比為1:20共混接種至含5ng/mL IL-7、10％AB型血清的RPMI 1640培養液中，37℃5％CO₂培養；

于培養7天后換液一半，再次按照所述DC細胞與所述載肽DC細胞數量比為1:20共混接種；

繼續培養4天后，向培養體系中均加入的10U/mLIL-2，繼續培養1天，即可得到所述細胞毒性T淋巴細胞。

6.根據權利要求3所述的T淋巴細胞，還包括由如SEQ ID NO.4～5所示的多肽誘導的輔助性T淋巴細胞。

7.根據權利要求6所述的T淋巴細胞，其中，所述輔助性T淋巴細胞由以下方法制得：

獲得預包被的孔板，所述孔板用anti-hCD3e單抗進行包被；

向包被的孔板中加入培養液和純化的外周血單核細胞，所述培養液為包含1μg/mLanti-hCD28、1ng/mL IL-12，10ng/mL IL-6、10ng/mL IL-23、5ng/mL TGF-β和1μg/mL的如SEQ ID NO.4～5所示至少之一的多肽的RPMI 1640培養液，并調整外周血單核細胞的濃度為10⁶個/mL；在5％CO₂細胞培養箱中培養3天后半量換液，繼續培養3天，即可得到所述輔助性T淋巴細胞。

8.權利要求1或2所述的多肽組合物在制備抗腫瘤細胞制劑中的應用；其中，所述腫瘤細胞包括人胃癌細胞、人子宮頸癌細胞、人肝癌細胞和人肺癌細胞至少一項。

9.權利要求3～7任一項所述的T淋巴細胞在制備抗腫瘤細胞制劑中的應用，其中，所述腫瘤細胞包括人胃癌細胞、人子宮頸癌細胞、人肝癌細胞和人肺癌細胞至少一項。

10.根據權利要求8或9所述的應用，其中，所述制劑選自細棒型埋植劑、微型滲透泵埋植劑、注射型埋植劑和微球注射劑中的一種。