[發(fā)明專利]特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111242145.9
• 申請日: 2021-10-25
• 公開（公告）號: CN114196672A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃淵余;梁興杰;陸梅
• 申請（專利權(quán)）人: 北京理工大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 黃志興

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA含有完全反向互補(bǔ)的正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和所述反義鏈的核苷酸序列分別為如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的任意一對所示。本發(fā)明還提供了含有上述siRNA的藥物組合物。本發(fā)明提供的siRNA藥物組合物可有效沉默小鼠PAK4基因表達(dá)，阻斷Wnt/β?catenin信號通路，促進(jìn)腫瘤免疫浸潤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

免疫療法是當(dāng)前腫瘤治療領(lǐng)域最具前景的方向之一，然而臨床上該療法的響應(yīng)率較低，僅為10-30％；腫瘤組織中免疫(殺傷性T)細(xì)胞浸潤不足是免疫療法臨床失敗的重要原因。已有研究發(fā)現(xiàn)，P21活化激酶4(p21-activated kinase 4，PAK4)是腫瘤阻止殺傷性T細(xì)胞浸潤、實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的關(guān)鍵靶點(diǎn)。PAK4可促進(jìn)β-catenin蛋白磷酸化及核轉(zhuǎn)移，激活WNT/β-catenin通路，從而導(dǎo)致瘤內(nèi)T細(xì)胞浸潤不足。因此，抑制PAK4是促進(jìn)殺傷性T細(xì)胞浸潤腫瘤組織，解除腫瘤免疫抑制狀態(tài)的關(guān)鍵。

siRNA藥物是最具戰(zhàn)略前景的生物制藥技術(shù)之一，近年來其獲批上市的速度呈加速趨勢，目前已有四款siRNA藥獲得FDA批準(zhǔn)，分別是Alnylam公司的Onpattro、Givlaari、Oxlumo及Leqvio，且預(yù)計(jì)在未來幾年里將會有更多siRNA藥物進(jìn)入市場。siRNA藥物可從mRNA水平阻止致病蛋白的表達(dá)，具有效率高、特異性好及長效等優(yōu)勢。

但是，目前尚無利用RNA干擾技術(shù)(RNAinterfering，RNAi)抑制PAK4表達(dá)、促進(jìn)腫瘤免疫浸潤的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用，該siRNA可有效沉默小鼠PAK4基因的表達(dá)，阻斷Wnt/β-catenin信號通路，促進(jìn)腫瘤免疫浸潤。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供一種特異性抑制PAK4基因表達(dá)的siRNA，所述siRNA含有完全反向互補(bǔ)的正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和所述反義鏈的核苷酸序列分別為如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的任意一對所示。

優(yōu)選地，所述正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

優(yōu)選地，所述正義鏈和/或所述反義鏈的至少一個(gè)核苷酸的核糖基上引入核糖修飾，所述正義鏈和/或所述反義鏈的磷酸-糖骨架中的磷酸酯基的至少一個(gè)為具有修飾基團(tuán)的磷酸酯基。

優(yōu)選地，所述核糖修飾為甲氧基修飾或氟代修飾，所述具有修飾基團(tuán)的磷酸酯基為磷酸二酯鍵中的氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

優(yōu)選地，按照5'末端到3'末端的方向，所述正義鏈的第5、7、8、9位的核苷酸為氟代修飾的核苷酸，所述正義鏈中其余位置的核苷酸為甲氧基修飾的核苷酸，所述反義鏈的第2、6、8、9、14、16位的核苷酸為氟代修飾的核苷酸，所述反義鏈中其余位置的核苷酸為甲氧基修飾的核苷酸；其中，所述氟代修飾的核苷酸為核糖基的2'-羥基被氟取代而形成的核苷酸，所述甲氧基修飾的核苷酸為核糖基的2'-羥基被甲氧基取代而形成的核苷酸。

優(yōu)選地，所述具有修飾基團(tuán)的磷酸酯基存在于由以下位置所組成的組中的至少一處：