[發(fā)明專利]一種幾丁質(zhì)酶和AfChi18基因及其表達(dá)方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111192540.0
• 申請(qǐng)日: 2021-10-13
• 公開（公告）號(hào): CN113717963B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊登峰;伍雅勵(lì);潘麗霞;陽麗艷;李紅亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西華仁醫(yī)學(xué)科技集團(tuán)有限公司;廣西科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N9/42
• 分類號(hào): C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/00;C12P19/04;C12P19/14;C12R1/19
• 代理公司: 北京睿智保誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 韓迎之

1.一種幾丁質(zhì)酶，其特征在于，所述幾丁質(zhì)酶的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述幾丁質(zhì)酶的AfChi18基因，其特征在于，所述AfChi18基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

3.一種重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒包括編碼權(quán)利要求1所述幾丁質(zhì)酶的AfChi18基因的核苷酸序列。

4.一種重組菌株，其特征在于，所述重組菌株表達(dá)權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒。

5.一種權(quán)利要求1所述幾丁質(zhì)酶的表達(dá)方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將AfChi18基因與質(zhì)粒載體連接，得到重組質(zhì)粒；

(2)將所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至克隆菌株，得到重組克隆菌株；

(3)提取所述重組克隆菌株中的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至表達(dá)菌株，得到重組表達(dá)菌株；

(4)將重組表達(dá)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，收集菌體破碎，得到幾丁質(zhì)酶。

6.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)方法，其特征在于，所述AfChi18基因的擴(kuò)增引物如SEQ?IDNo.3和SEQ?ID?No.4所示。

7.如權(quán)利要求5或6所述的表達(dá)方法，其特征在于，所述質(zhì)粒載體為pET28a，所述克隆菌株為E.coliDH5α，所述表達(dá)菌株為E.coliBL21DE₃codon?plusRIL。

8.如權(quán)利要求7所述的表達(dá)方法，其特征在于，步驟(4)中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)是將重組表達(dá)菌株接入10ml含有48～52mg/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基中在36～38℃下培養(yǎng)12～18h，再按照1％v/v的接種量接種至500ml含48～52mg/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，在36～38℃下培養(yǎng)至OD₆₀₀＝0.6～0.8，然后加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，于25～30℃，180～200rpm下誘導(dǎo)8～10h。

9.如權(quán)利要求8所述的表達(dá)方法，其特征在于，所述異丙基-β-D-硫代半乳糖苷在第二LB培養(yǎng)基中的終濃度為0.0008～0.0012M。

10.一種權(quán)利要求1所述的幾丁質(zhì)酶在降解幾丁質(zhì)方面的應(yīng)用。