[發明專利]一種多花黃精的開放式組織培養方法

有效

• 申請號: 202111182126.1
• 申請日: 2021-10-11
• 公開（公告）號: CN113678737B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 姜武;陳家棟;段曉婧;陶正明
• 申請（專利權）人: 浙江省亞熱帶作物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 溫州知遠專利代理事務所(特殊普通合伙) 33262
• 代理人: 劉超

1.一種多花黃精的開放式組織培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)培養袋的消毒

培養袋采用專門的帶有透氣膜的自立式自封袋，用自來水清洗干凈后，用0.1％次氯酸鈉浸泡，培養袋用重物壓著全部浸沒即可，浸泡2～3h；浸泡結束后將培養袋撈起，晾干，濾干水分即可；

(2)培養基的配置

按照常規培養基的配制方法配制基礎培養基，基礎培養基為MS+0.3％蔗糖+7.2％瓊脂+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L，根據多花黃精組培不同生長時期的需要添加不同種類的激素和濃度，加水定容，蓋上蓋子煮沸2～3min，調節pH為5.8～6.0，加上YJ104抑菌劑30～60mg/L；

多花黃精增殖培養基為：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA，后續開放式組織培養中當傳代次數多時可適當調整為MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA；

(3)接種操作

接種室用紫外燈照射消毒20～30min，開通風30min±5min，接種的臺子清潔干凈后用，75％酒精擦拭消毒，接種的器械用紅外線接種滅菌器滅菌；

(4)誘導培養

取生長健壯、無病蟲害的多花黃精塊莖放在室內的沙堆里，用1000倍50％多菌靈溶液澆透，用地膜覆蓋，30～40天有嫩莖產生，取用這一時期的多花黃精嫩莖作為誘導材料，清除表面泥土晾干后，切成2cm×2cm×4cm大小的塊莖，用0.1％十二烷基二甲基芐基溴化銨浸泡消毒10～15min，無菌水清洗5～6遍，切割成1cm×1cm×2cm大小的莖尖；用2％次氯酸鈉振蕩消毒6～8min，無菌水清洗5～6遍，切割成0.5cm×0.5cm×0.5cm大小的莖尖，接種MS+0.3％蔗糖+7.2％瓊脂+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+30～60mg/L抑菌劑的培養基中；培養室溫度24±1℃，每日光照18h，前7天光照強度為500-1000lx，之后的光照強度為1000-1500lx，空氣濕度60％～70％；

(5)增殖培養

誘導培養長成叢芽后，將叢芽按2～3株一叢進行切割，接種于增殖培養基中，增殖培養基為MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+30～60mg/LYJ104抑菌劑，后續開放式組織培養中當傳代次數多時可適當調整為MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+30～60mg/LYJ104抑菌劑，20天轉接一次；培養室溫度24±1℃，前7天進行暗培養，之后每日光照18h，光照強度為1000-1500lx，空氣濕度60％～70％；

(6)生根培養

當苗高不低于3cm，切割成單株，轉入1/2MS+0.2～0.5mg/L NAA+抗菌劑的生根培養基中，培養20～30天，即可移栽；培養室溫度24±1℃，每日光照12h，光照強度為2000-2500lx，空氣濕度60％～70％；

YJ104抑菌劑配方為：A液：植物提取液150ml+青霉素50ml；將蒼術塊莖、生姜根莖、蘆薈葉、艾葉、樟樹皮和金銀花進行混合后，加入乙醇中攪拌粉碎，得到混合液；將所得到的混合液進行超聲波處理后，過濾去除固體雜質，再蒸發濃縮去除乙醇，得到植物提取液；B液：表面活性劑50ml和去離子水150ml；使用時將A液和B液混合搖勻后獲得YJ104抑菌劑；

在上步驟誘導出多花黃精不定芽之后直接在開放有菌的條件下進行增殖和生根培養。