[發明專利]一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法

在審

• 申請號: 202111159345.8
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN114058512A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 黃炳耀;韋玉曉;韋鳳堯;唐振洲;陳曉倩;韋金銳;劉永宏
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 天津創智睿誠知識產權代理有限公司 12251
• 代理人: 王海濱

本發明公開了一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法，本發明通過借助廉價易獲得的96孔PCR板為工具，以轉印的方式實現微藻高通量轉接傳代。實驗結果顯示，除了由初代藻落(第一代)向第二代藻落轉接較為費時外，后續第二到第三，第三到第四，以此類推的后續轉接傳代都極為簡單便捷和高通量。本發明顯著加快了三角褐指藻遺傳育種過程中突變體或轉基因藻株的轉接傳代過程，具有簡單，快速，容易實現，經濟適用的優點。

技術領域

本發明屬于微藻遺傳育種技術領域，具體來說涉及一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法。

背景技術

藻種的保存與傳代是微藻遺傳育種過程中的重要耗時步驟，在誘變育種過程中尤其明顯。誘變育種需要建立包含大量待篩選突變體株系的突變體庫，突變體數量少則過千，多則數萬。對這些突變體的保存與傳代一直是突變體庫管理的一大難題。對于高等植物中，株系材料可以以種子的形式保存；對于真菌和細菌等微生物，可以簡單可靠的的保存于超低溫環境中，但是對于微藻，雖然也可以保存于超低溫環境，但是對于多數種類的微藻而言，超低溫環境的保存步驟繁瑣，存活率不好，后期復蘇效果欠佳，藻種容易退化。因此，在微藻培養過程中，往往選擇不斷傳代的方式來保存藻種。并且，在誘變育種的操作過程中，得到一定數量的突變體后往往就開始依據篩選條件篩選目標突變體，這就需要突變體庫處于正常生長狀態，隨時能用于目標藻株的篩選。

在微生物的研究中，有條件的實驗室可以裝備全自動克隆/菌種挑取系統(如Kbiosystems系統)來重組子或突變子的高通量克隆挑取，使科研人員從繁瑣且耗時耗力的挑克隆工作解脫出來，該儀器同樣可以用于微藻研究。但是該套設備價格昂貴，無法裝備這種自動化儀器的實驗室只能選擇人工方式，挨個挑取藻斑。那么，能不能改進人工挑取和轉接的方法，以低成本的方式顯著減少藻種保存和轉接過程中的工作量。

本發明的目的在于找到一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法，顯著減少微藻遺傳育種過程中的工作量。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法，在實驗中作者發現96孔板管底外尖部呈規則排列，相當于96根接種針，經過打磨滅菌后，可作為接種工具使用，以轉印的方式實現微藻高通量轉接傳代。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種簡單便捷的實現微藻高通量轉接傳代的方法，包括下述步驟：

步驟一、簡易實驗工具制作

使用砂紙對96孔PCR板管底外尖部表面進行打磨，將打磨后的96孔PCR板殺菌烘干；

步驟二、單藻落的形成

完成誘變育種或遺傳轉化的藻液稀釋后涂布于固體培養基上，在適宜條件下培養直到出現藻斑；

步驟三、轉接第一代藻落

完成誘變育種或遺傳轉化的藻液所涂布的平板為第一代平板，所得藻落為第一代藻落，用牙簽以一藻落對應一個管底的方式，逐一挑起藻落涂抹于PCR管管底；

步驟四、轉印藻落

當一定數量的管底沾有藻細胞后，將管底整齊劃一的印在在新的固體平板培養基表面；

步驟五、復轉印藻落

后續轉接傳代或者接入新的篩選平板，繼續用同陣列排序的96孔PCR板沾取藻落細胞，轉印到新的平板或者裝有液體培養基的96孔PCR板中。

在上述技術方案中，在步驟二中，將打磨后的96孔PCR板泡在75％酒精中殺菌3h，殺菌完成后于超凈臺中取出用滅菌飯盒裝好，放入60℃烘箱中烘干。