[發明專利]SARS-CoV-2特異性多肽及其應用

在審

• 申請號: 202111149547.4
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113845577A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 劉軍;張杰;高福
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K19/00;A61K39/215;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

本發明公開了SARS?CoV?2特異性多肽及其應用，屬于免疫檢測領域。本發明提供了兩條針對SARS?CoV?2特異性多肽，并且用相應多肽制備了多肽?MHC四聚體，使用多肽?MHC四聚體檢測SARS?CoV?2感染康復者的T細胞，陽性率分別為3.63％、2.37％，明顯高于陰性對照組0.061％、0.096％，有效地增加多肽?MHC與特異性T細胞表面TCR的親和力，可以作為T細胞評價的有效工具，該技術還可以用于特異性T細胞的分離與克隆，結合單細胞測序技術分離特異性TCR、作為T細胞激活試劑等。在對SARS?CoV?2感染或疫苗接種后人群的T細胞研究方面具有較高的應用價值。

技術領域

本發明涉及SARS-CoV-2特異性多肽及其應用，屬于免疫檢測領域。

背景技術

新型冠狀病毒SARS-CoV-2自2019年12月首次被發現以來，在全球迅速傳播，已被世界衛生組織宣布為國際關注的嚴重公共衛生緊急事件(PHEIC)。目前SARS-CoV-2大流行已經持續了一年半，造成2.13億多2019冠狀病毒病(COVID-19)病例，440萬人死亡，這仍然是全球公共衛生面臨的一項嚴峻挑戰。開發安全有效的疫苗是控制SARS-CoV-2傳播的重要手段之一。T細胞在病毒清除中發揮著非常重要的作用，在SARS-CoV-2疫苗免疫效果的評估中，T細胞免疫應答的評估尤為重要。對SARS-CoV-2感染康復者的T細胞免疫進行評估，能夠為疫苗的研發提供依據。開發高效、快速、敏感的檢測SARS-CoV-2感染后患者、康復者和疫苗接種者的T細胞狀態的檢測手段尤為重要。

MHC-四聚體技術是將MHC單體分子四聚體化，提高其與T細胞上的TCR的親和力，進而提高檢測的靈敏度的技術。該技術可應用于檢測抗原特異性T淋巴細胞、T細胞的直接分離與克隆、分離特異性TCR、原位染色等，為研究與細胞免疫反應有關的一系列工作提供了高效、快速、敏感的檢測手段。然而目前還沒有用四聚體技術評價SARS-CoV-2感染康復人群或疫苗接種人群T細胞免疫水平的報道。

發明內容

本發明的第一個目的是提供SARS-CoV-2特異性多肽，所述多肽氨基酸序列如SEQID NO.1所示；或如SEQ ID NO.2所示。

本發明的第二個目的是提供所述特異性多肽的衍生物，是在所述SARS-CoV-2特異性多肽的氨基酸序列上取代、或缺失，或添加一個或幾個氨基酸，且具有與所述多肽相同抗原性的多肽衍生物。

本發明的第三個目的是提供對SARS-CoV-2感染或疫苗接種后人群的T細胞高度特異性和高度靈敏性的多肽-MHC四聚體，所述多肽-MHC四聚體由生物素化的MHC-I與所述SARS-CoV-2特異性多肽，或，由生物素化的MHC-I與所述特異性多肽衍生物結合。

本發明的第四個目的是提供所述多肽-MHC四聚體的制備方法，包括如下步驟：(1)用大腸桿菌表達MHC輕鏈和MHC重鏈；(2)稀釋復性，制備多肽/MHC復合物；(3)制備生物素化的多肽/MHC復合物；(4)生物素化的多肽/MHC復合物與帶標記的鏈親和素反應。

在本發明的一種實施方式中，所述MHC重鏈C端連接生物素。

在本發明的一種實施方式中，所述MHC中的C端添加能夠連接生物素的氨基酸序列GGGLNDIFEAQKIEWHE。

在本發明的一種實施方式中，所述步驟(3)中，在BirA酶的催化下多肽/MHC復合物與D-biotin結合。

在本發明的一種實施方式中，所述步驟(3)中，所述D-biotin的濃度為400～600μmol/L。

在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)中，按照摩爾比(4～6)：(0.5～1.5)的比例與帶標記的鏈親和素反應。

在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)中，按照摩爾比5：1的比例與帶標記的鏈親和素反應。