[發(fā)明專利]一種緩沖液及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的凍干方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111135934.2
• 申請(qǐng)日: 2021-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN113759130B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李博飛;劉聰;楊濤;張廣俊;馮玉靜;孫佳;鄭興華;張明琛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京美聯(lián)泰科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/531;G01N33/53
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 朱寶莉

本發(fā)明屬于膠質(zhì)纖維酸性蛋白保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種緩沖液及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的凍干方法。緩沖液，包括以下組分：4?嗎啉乙磺酸、NaCl、ZnCl₂、MgCl₂·6H₂o、牛血清白蛋白、酪蛋白、甘氨酸、聚乙二醇、海藻糖。能夠有效保存膠質(zhì)纖維酸性蛋白，能夠使膠質(zhì)纖維酸性蛋白檢測(cè)過(guò)程中的抗壓凍干品復(fù)融后有效保存其活性，提高檢測(cè)靈敏度；所述凍干保護(hù)方法對(duì)膠質(zhì)纖維酸性蛋白的保存具有較好的保存效果，可以使得GFAP在4?8℃儲(chǔ)存期達(dá)到18個(gè)月、在?20℃儲(chǔ)存期達(dá)到3年。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于膠質(zhì)纖維酸性蛋白保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種緩沖液及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的凍干方法。

背景技術(shù)

中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要成分是星形膠質(zhì)細(xì)胞，它的主要功能是對(duì)神經(jīng)元起支持、營(yíng)養(yǎng)的作用，同時(shí)在損傷反應(yīng)、宿主防御機(jī)制和組織修復(fù)等過(guò)程當(dāng)中發(fā)揮重要的作用。當(dāng)神經(jīng)系統(tǒng)損傷時(shí)，星形膠質(zhì)細(xì)胞可以大量表達(dá)并且活性增強(qiáng)。其中膠質(zhì)纖維酸性蛋白是星形膠質(zhì)細(xì)胞中的主要成分。

膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)是一種Ⅲ型中間纖絲蛋白。它是星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，是唯一的在該細(xì)胞表達(dá)并且表達(dá)豐富的這樣的一種物質(zhì)。在生理或生化損傷，以及病理和生理?yè)p害的雙重作用下，都可以刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞它產(chǎn)生GFAP，釋放進(jìn)入腦脊液，再通過(guò)受損的血腦屏障釋放入血。因此在理論上我們就可以在血當(dāng)中檢測(cè)GFAP，從而推斷腦脊液當(dāng)中或者是我們神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，它是否產(chǎn)生了GFAP這樣的特異性的標(biāo)志物。

人的GFAP由432個(gè)氨基酸組成，主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，參與細(xì)胞骨架的構(gòu)成并維持其張力強(qiáng)度。GFAP是一種神經(jīng)系統(tǒng)特異性蛋白，其在腦損傷中對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)功能的恢復(fù)有重要影響。在TBI發(fā)生后，GFAP在1小時(shí)內(nèi)會(huì)通過(guò)血腦屏障進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清GFAP顯著升高。對(duì)TBI的早期診斷，鑒別診斷和判斷預(yù)后有重要的意義，臨床上主要用于腦外傷的輔助診斷。

現(xiàn)有技術(shù)涉及到相關(guān)膠質(zhì)纖維酸性蛋白的檢測(cè)方法如中國(guó)專利申請(qǐng)CN201811391978.X公開一種人體膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)磁微粒分離化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法。中國(guó)專利申請(qǐng)CN201911101693.2公開一種膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒和應(yīng)用。這些方法的應(yīng)用過(guò)程中膠質(zhì)纖維酸性蛋白的保存具有至關(guān)重要的作用。但是現(xiàn)有技術(shù)中并沒(méi)有很好地針對(duì)膠質(zhì)纖維酸性蛋白的保存技術(shù)或者保存，這對(duì)于膠質(zhì)纖維酸性蛋白的保存或檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用都具有較大的影響。

本發(fā)明的目的旨在提供一種緩沖液及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的凍干方法，以提高使膠質(zhì)纖維酸性蛋白的保存活性，以期更好的發(fā)展膠質(zhì)纖維酸性蛋白的檢測(cè)技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

為克服以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種緩沖液，該緩沖液能夠有效提高GFAP的活性、提高抗原凍干品的檢測(cè)靈敏度，同時(shí)能夠有效延長(zhǎng)GFAP的保存期限。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

一種緩沖液，包括以下組分：4-嗎啉乙磺酸、NaCl(氯化鈉)、ZnCl₂(氯化鋅)、MgCl₂·6H₂o(六水合氯化鎂)、牛血清白蛋白、酪蛋白、甘氨酸、聚乙二醇、海藻糖。

優(yōu)選地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述緩沖液，包括以下組分：4-嗎啉乙磺酸5-30份、NaCl8-12份、ZnCl₂ 0.01-0.5份、MgCl₂·6H₂o 0.1-15份、牛血清白蛋白2-50份、酪蛋白2-50份、甘氨酸1-15份、聚乙二醇0.2-25份、海藻糖10-100份。