[發(fā)明專利]一種包載靶標(biāo)lncRNA Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111131120.1
• 申請(qǐng)日: 2021-09-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113876691B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王征;王琳;劉峰;戴拯;黃雷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K9/06
• 分類號(hào): A61K9/06;A61K31/7088;A61K47/18;A61K47/28;A61K47/36;A61K47/46;A61P1/00;A61P35/00;B82Y5/00
• 代理公司: 武漢信合紅谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42264
• 代理人: 嚴(yán)情

本發(fā)明公開(kāi)了一種包載靶標(biāo)lncRNA?Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法和應(yīng)用。制備方法包括：含有編碼Pvt1短發(fā)卡RNA的質(zhì)粒(shPvt1)構(gòu)建；鼠源結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞膜CM的制備；脂質(zhì)體(D)修飾細(xì)胞膜包載shPvt1納米粒子(shPvt1?CM?D)的制備；制備氧化海藻酸鹽(OA)；制備己二酸二酰肼修飾的透明質(zhì)酸HA?ADH。通過(guò)移植于結(jié)直腸癌(CRC)術(shù)后原位，該水凝膠持續(xù)性釋放shPvt1?CM?D和化療藥物奧沙利鉑(Oxa)并介導(dǎo)三重免疫響應(yīng)：聯(lián)合增強(qiáng)的腫瘤免疫原性細(xì)胞死亡(ICD)；雙重效應(yīng)的腫瘤疫苗；弱化粒細(xì)胞?髓源抑制細(xì)胞(G?MDSC)的免疫抑制活性，最終重塑腫瘤環(huán)境以達(dá)到抑制CRC術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用復(fù)合材料技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種包載靶標(biāo)lncRNA?Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)直腸癌(CRC)是世界第四大癌癥殺手，外科手術(shù)依然是CRC的主流療法，但術(shù)后殘余的微腫瘤塊和循環(huán)腫瘤細(xì)胞易導(dǎo)致復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其死亡占比高達(dá)90％。傳統(tǒng)的化療和放療面臨諸如強(qiáng)烈的并發(fā)癥和毒副作用等問(wèn)題。盡管新興的免疫治療有望抑制CRC的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，但免疫響應(yīng)率低。因此，亟待發(fā)展安全且高效的術(shù)后療法抑制CRC的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

長(zhǎng)非編碼RNAs(lncRNAs)具有200個(gè)以上的核苷酸且在調(diào)控基因表達(dá)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。lncRNA漿細(xì)胞瘤變異易位基因1(Pvt1)的敲減能有效抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，敏化化療和弱化粒細(xì)胞髓源抑制細(xì)胞(G-MDSCs)的免疫抑制活性。授權(quán)公告號(hào)CN107043823B的專利公開(kāi)了一種結(jié)直腸癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物及應(yīng)用，所述腫瘤標(biāo)志物為lncRNA，定位于第17號(hào)染色體chr17:47785696-47797422。根據(jù)lncRNA-KAT7序列，設(shè)計(jì)并合成特異性實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物，制備用于結(jié)直腸癌診斷或者療效預(yù)測(cè)的制劑。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR制劑，在結(jié)直腸癌臨床病例標(biāo)本中檢測(cè)lncRNA-KAT7的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)lncRNA-KAT7可作為結(jié)直腸癌的腫瘤標(biāo)志物，可制備用于結(jié)直腸癌輔助診斷、療效預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷的制劑或試劑盒。然而，單一lncRNA的調(diào)控對(duì)重塑腫瘤微環(huán)境(TME)的影響易受TME中復(fù)雜基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的制約，不能有效抑制CRC術(shù)后復(fù)發(fā)、肝轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)端瘤生長(zhǎng)，急需提高靶標(biāo)lncRNA重塑TME的療效。不僅如此，目前有關(guān)lncRNA的報(bào)道主要集中于機(jī)制研究，而基于lncRNA調(diào)控的治療策略少有報(bào)道。

融合納米技術(shù)的支架能時(shí)空緩釋負(fù)載的藥物分子，并提高其生物穩(wěn)定性、生物分布和胞內(nèi)攝取能力。不僅如此，腫瘤細(xì)胞膜能用于仿生納米粒子的制備，其包含的全系列同源腫瘤相關(guān)抗原(TAAs)有助于樹(shù)突細(xì)胞(DC)的成熟和后續(xù)免疫響應(yīng)的激活。因此，亟待基于此思路設(shè)計(jì)一種治療結(jié)直腸癌的生物醫(yī)用復(fù)合材料。

發(fā)明內(nèi)容

(一)解決的技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明的目的在于提供一種包載靶標(biāo)lncRNA?Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法和應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中單一lncRNA的調(diào)控對(duì)重塑腫瘤微環(huán)境(TME)的影響易受TME中復(fù)雜基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的制約，不能有效抑制CRC術(shù)后復(fù)發(fā)、肝轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)端瘤生長(zhǎng)的問(wèn)題。

(二)技術(shù)方案

為實(shí)現(xiàn)上述包載靶標(biāo)lncRNA?Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法和應(yīng)用解決現(xiàn)有技術(shù)中單一lncRNA的調(diào)控對(duì)重塑腫瘤微環(huán)境(TME)的影響易受TME中復(fù)雜基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的制約，不能有效抑制CRC術(shù)后復(fù)發(fā)、肝轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)端瘤生長(zhǎng)的問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種包載靶標(biāo)lncRNA?Pvt1納米粒子的水凝膠及其制備方法，包括以下步驟：

1)含有編碼Pvt1短發(fā)卡RNA的質(zhì)粒(shPvt1)的構(gòu)建：

shPvt1序列的設(shè)計(jì)經(jīng)http://sirna.wi.mit.edu/查詢獲得，并利用T4?DNA連接酶將其克隆至pLKO.1-TRC載體中。隨后經(jīng)DNA測(cè)序驗(yàn)證該質(zhì)粒的成功構(gòu)建。