[發明專利]青環海蛇毒素競爭法膠體金/納米花免疫層析檢測卡

在審

• 申請號: 202111128754.1
• 申請日: 2021-09-26
• 公開（公告）號: CN113848318A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 王榮智;黃曉婷;汪世華;陳睿;唐恒坤;高燁宏;凌素美
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明涉及抗體工程與免疫檢測領域，提供了一種青環海蛇毒素SN311競爭法膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡。本發明提供的青環海蛇毒素SN311競爭法膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡，檢測時間10 min，膠體金免疫側流層析檢測卡的檢測閾值（消除T線）達到25μg/mL，檢測限（vLOD）達到0.1 ng/mL；納米花免疫側流層析檢測卡的檢測閾值（消除T線）達到25μg/mL，檢測限（vLOD）達到0.01 ng/mL。首次利用納米花材料與抗青環海蛇毒素SN311單克隆抗體結合，制備膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡，可實現對青環海蛇毒素SN311的高靈敏快速檢測。

技術領域

本發明屬于抗體工程與免疫檢測領域，具體涉及一種青環海蛇毒素SN311競爭法膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡。

背景技術

我國是海洋大國，在實現海洋資源可持續開發的過程中，沿海海域存在的有毒海洋生物勢必對海洋作業人員的生命健康造成威脅，因此海洋生物傷的防治研究工作對生產、醫療工作、科學研究以及軍隊維護有重要的現實意義，所以必須盡快著手開展抗海洋生物傷的科學應用研究。

青環海蛇（Hydrophis cyanocinctus Daudin）廣泛分布在我國山東以南的沿海區域，其蛇毒毒性強烈，主要的成分為α-神經毒素和一些其他蛋白，起主要作用的為α-神經毒素。α-神經毒素能夠結合在骨骼肌運動終板部位的煙堿型乙酰膽堿受體，從而阻斷骨骼肌的神經肌肉接頭傳遞，因此青環海蛇咬傷會出現肌肉麻痹，從而導致呼吸肌麻痹進而機體窒息死亡。由于青環海蛇蛇毒難以采集，對于青環海蛇毒素的研究及檢測也相對滯后，此開展關于青環海蛇蛇毒檢測方法的研究具有重要意義。

免疫膠體金層析技術的實現還得益于其載體免疫膠體金層析試紙條（immunochromatograp hic test strips，ICTSs），一種通過硝酸纖維素膜將加入的待檢測樣品固定在能與樣品發生特異性結合的受體處位置，隨著復合物的隨摸流的累積，膠體金在檢測試紙條上顯色，這個過程往往只需要幾分鐘時間，因此此技術大大降低了檢測的時間成本，加之其操作簡單，特異性強，靈敏度高，很快在科學研究中得到廣泛應用。隨著納米材料技術的成熟，金屬納米粒子的使用也越來越廣泛，金屬納米粒子具有有與納米材料一樣的光電性，以及其獨特的生物相容性，自然而然受到免疫學的重視，在免疫學研究中的應用隨著膠體金的廣泛使用而更加深遠。膠體金因為受離子層的靜電作用在溶液中以膠體分散狀態顯現。膠體金納米粒子作為標記材料，其制備工藝簡單，穩定性強，粒子分散性好以及優質的光學特性，在免疫標記方法上具有獨特的優勢。金納米花作為一種新型的高催化膠體金技術在近幾年發展迅速，金納米花是在膠體金基礎上通過種子生長法放大膠體金粒子，行成的形似花狀的納米粒子，其具有更顯著的光學消化系數和催化活性，一定程度上大大提高了標記檢測的靈敏度。目前制備金納米粒子的方法有物理合成法和化學合成法，但化學合成法中的液還原法也稱為種子生長法因其操作簡單而受到廣大研究者的青睞。種子生長法是在膠體金顆粒的基礎上利用還原氯金酸行成表面不規則的較大顆粒的金納米花。實驗中采用對苯二酚作還原劑，可以調控合成了不同粒徑的納米花。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速和特異性較強的青環海蛇毒素SN311競爭法膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡，該檢測卡能夠實現對青環海蛇毒素SN311的快速靈敏檢測。

為實現上述目的，本發明提供了一種青環海蛇毒素SN311競爭法膠體金/納米花免疫側流層析檢測卡，檢測卡包括樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和塑料卡殼；所述硝酸纖維素膜上設置有質控線（C線）和檢測線（T線），所述質控線上噴有羊抗鼠的IgG抗體，所述檢測線上包被有青環海蛇毒素SN311抗原；所述的金標墊上含有膠體金/納米花標記的抗青環海蛇毒素SN311單克隆抗體。

所述金標墊中所含有膠體金/納米花標記的抗青環海蛇毒素SN311單克隆抗體，是由膠體金/納米花標記的抗青環海蛇毒素SN311單克隆IgG抗體溶液以每100 mm/s 和2 μL/cm的噴涂速度通過噴金點膜機噴涂在金標墊上干燥后得到的。