[發(fā)明專利]一種分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)劑及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111125384.6
• 申請(qǐng)日: 2021-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113801926A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫云飛;余文博;萬(wàn)慧婷;石煒菁;姜文彬;趙美青;馮莉;周玭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北海卓生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;F26B5/06
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 劉誠(chéng)

本發(fā)明公開(kāi)了一種分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)劑及應(yīng)用，所述凍干保護(hù)劑包括海藻糖80～120mg/mL、蔗糖80～120mg/mL、甘露醇2～5wt％、右旋糖酐3～7mmol/L、聚乳酸?羥基乙酸共聚物0.5～6mg/mL、聚賴氨酸5～20mg/mL、吐溫?800.3～0.7wt％、二硫蘇糖醇0.05～0.25mg/mL、維生素組合5～20mg/mL。本發(fā)明提供凍干保護(hù)劑可與熒光PCR需要用到的組分制備在一起，并進(jìn)行凍干以制得分子檢測(cè)試劑，可實(shí)現(xiàn)常溫運(yùn)輸及保存，且適用范圍廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物分子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)劑及應(yīng)用。

背景技術(shù)

核酸診斷是用分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，通過(guò)直接探查核酸的存在狀態(tài)或缺陷，從核酸結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或翻譯水平分析核酸的功能，從而對(duì)人體狀態(tài)與疾病做出診斷的方法。它的目標(biāo)分子是DNA或RNA，反映核酸的結(jié)構(gòu)和功能。檢測(cè)的基因有內(nèi)源性(即機(jī)體自身的基因)和外源性(如病毒、細(xì)菌等)兩種，前者用于診斷基因有無(wú)病變，后者用于診斷有無(wú)病原體感染。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物分子體外的特殊復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的核酸大幅增加。具有靈敏高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于核酸診斷領(lǐng)域。

目前的PCR擴(kuò)增試劑基本呈液體狀態(tài)，其組分DNA聚合酶、dNTP、引物及探針等需要儲(chǔ)存于-20℃的冷凍環(huán)境中，且反復(fù)凍融對(duì)于試劑性能有一定的影響，試劑低溫保存對(duì)于運(yùn)輸、儲(chǔ)存及使用過(guò)程等有較高的要求。此外，液體檢測(cè)試劑需要冷鏈運(yùn)輸，運(yùn)輸成本較高，且容易因儲(chǔ)存溫度不當(dāng)導(dǎo)致試劑性能下降。

冷凍干燥技術(shù)是使混合物中已經(jīng)凍結(jié)的固態(tài)冰不經(jīng)融化成液態(tài)水的過(guò)程而直接升華成氣態(tài)，最終去除水分并保留其他有效組分的新式高效干燥技術(shù)。由于生物活性原料在固態(tài)干粉狀態(tài)下的穩(wěn)定性遠(yuǎn)高于液態(tài)，因此，通過(guò)凍干脫水處理即能實(shí)現(xiàn)反應(yīng)試劑體系中各組分在室溫下的長(zhǎng)期保存及穩(wěn)定運(yùn)輸。

目前診斷試劑的凍干工藝的缺陷有：1)凍干時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，一般都需要30個(gè)小時(shí)以上；2)凍干后酶活性損失嚴(yán)重，擴(kuò)增效率降低、檢測(cè)靈敏度降低等；3)凍干品后期容易塌陷；4)凍干保護(hù)劑等添加物會(huì)抑制后序的擴(kuò)增反應(yīng)等。

因此，有必要提供一種分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)劑及應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)劑及應(yīng)用，以至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)描述的諸多問(wèn)題之一。

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于，提供一種分子檢測(cè)凍干保護(hù)劑，包括如下濃度的組分：海藻糖80～120mg/mL、蔗糖80～120mg/mL、甘露醇2～5wt％、右旋糖酐3～7mmol/L、聚乳酸-羥基乙酸共聚物0.5～6mg/mL、聚賴氨酸5～20mg/mL、吐溫-800.3～0.7wt％、二硫蘇糖醇0.05～0.25mg/mL。

進(jìn)一步地，所述組分為：海藻糖100mg/mL、蔗糖100mg/mL、甘露醇4wt％、右旋糖酐5mmol/L、聚乳酸-羥基乙酸共聚物4mg/mL、聚賴氨酸10mg/mL、吐溫-800.5wt％、二硫蘇糖醇0.15mg/mL。

進(jìn)一步地，所述組分還包括維生素組合5～20mg/mL，所述維生素組合包括維生素B、維生素C、維生素D及維生素K中的一種或多種。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于，提供一種分子檢測(cè)試劑，包括分子檢測(cè)體系，還包括如上所述的分子檢測(cè)凍干保護(hù)劑。進(jìn)一步地，所述分子檢測(cè)體系包括熱啟動(dòng)Taq酶、UNG酶及dNTP。優(yōu)選地，所述分子檢測(cè)體系還包括反轉(zhuǎn)錄MMLV酶、引物、探針和緩沖液。

本發(fā)明還提供一種上述分子檢測(cè)試劑的凍干保護(hù)方法，包括如下步驟：

1)取分子檢測(cè)體系和凍干保護(hù)劑，配制得到分子檢測(cè)試劑；