[發(fā)明專利]一種新型促睡眠乳源活性肽CCL-2S及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111101311.3
• 申請(qǐng)日: 2021-09-18
• 公開（公告）號(hào): CN113754751B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹庸;陳媛媛;梁曹雯;劉星雨;劉飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C07K1/20;C07K1/34;C07K1/36;A61K38/17;A61P25/20;A23L33/18
• 代理公司: 鄭州知?jiǎng)艑＠硎聞?wù)所(普通合伙) 41193
• 代理人: 韓松

本發(fā)明涉及一種新型促睡眠乳源活性肽CCL?2S，其氨基酸序列為FALPQYLK。本發(fā)明以乳源酪蛋白酶解物為原料，采用脫鹽等基礎(chǔ)手段除雜后，利用體外膜片鉗技術(shù)從牛奶中分離鑒定出一種具有抑制神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位發(fā)放頻率、能促進(jìn)睡眠的新型促睡眠乳源活性肽CCL?2S。同時(shí)，本發(fā)明提供的新型促睡眠乳源活性肽安全無毒，可應(yīng)用于制備促睡眠功能性食品等產(chǎn)品，可充分利用乳產(chǎn)品資源，為乳源多肽的高值化利用提供了新途徑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于乳源有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新型促睡眠乳源活性肽CCL-2S及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

睡眠約占人一生中三分之一的時(shí)間，良好的睡眠是身心健康的前提保障。隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏普遍加快，各方面壓力等造成失眠的現(xiàn)象越來越多。睡眠不足會(huì)直接導(dǎo)致人們思維遲緩、頭腦緊張、注意力不集中、行動(dòng)遲緩、厭煩、憂慮、倦怠，對(duì)工作缺乏熱情，使工作主動(dòng)性與工作意愿下降，從而降低工作效率。長期以往，睡眠不足的人會(huì)感到特別的疲憊辛苦，情緒不穩(wěn)定，暴躁、易怒，缺乏自制力，造成心理方面嚴(yán)重的問題。此外，失眠還會(huì)導(dǎo)致抵抗力下降，患病機(jī)率大。

目前，臨床上常用化學(xué)合成類鎮(zhèn)靜催眠藥，例如以苯二氮?類為主的鎮(zhèn)靜促睡眠藥，可治療失眠及其他疾病引起的睡眠障礙。但長期服用這類藥物會(huì)出現(xiàn)多種副作用，患者對(duì)該類藥物易形成依賴。因此，尋找一種藥效顯著、副作用小、安全的改善睡眠藥物是醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域的一項(xiàng)重要任務(wù)。

牛奶具有良好的促睡眠效果，牛乳中含有多種生物活性多肽，但天然牛乳中活性多肽的含量較少，無法滿足亞健康人們的需要。牛乳酪蛋白，是許多具有潛在生物活性物質(zhì)的前體，通過蛋白酶的酶解作用，可以得到具有生物學(xué)功能的乳源生物活性肽。這些小肽一般由2-20個(gè)氨基酸殘基組成，能夠?qū)C(jī)體的消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等多方面產(chǎn)生積極的影響，具有調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、抗菌、抗氧化、抗高血壓、免疫調(diào)節(jié)等生理活性。

中國發(fā)明專利CN202010387572.5公開了一種乳源活性肽CCL-3S在制備促睡眠產(chǎn)品中的應(yīng)用，利用體外膜片鉗技術(shù)從牛奶中分離鑒定出一種具有抑制神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位發(fā)放頻率、能促進(jìn)睡眠的乳源活性肽CCL-3S，該乳源活性肽氨基酸序列為HQGLPQEVLNENLLR，分子量為1759.998Da，作用于細(xì)胞后，Vm的變化率為12.56±?3.67％，與空白組比較，具有顯著性抑制作用(p0?.05)，能顯著抑制神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位發(fā)放頻率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新型促睡眠乳源活性肽CCL-2S，能顯著抑制神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位發(fā)放頻率，有來源安全、促睡眠效果好、活性穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種新型促睡眠乳源活性肽CCL-2S，包括如SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列，Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys（FALPQYLK），分子量為979.17，可用于制備促睡眠產(chǎn)品，即功能性食品或者藥品。

本發(fā)明新型促睡眠乳源活性肽CCL-2S的制備方法，包括以下步驟：

（1）原料預(yù)處理：濃縮乳源酪蛋白酶解物原料，得到多肽飽和水樣，采用真空噴霧干燥，得到多肽粉末；

（2）C18制備柱一次分離

將所得多肽粉末用超純水配制成200mg/mL的溶液，過0.22?μm濾膜后，借助制備型高效液相色譜對(duì)促睡眠肽進(jìn)行初步分離；

根據(jù)圖譜中出峰時(shí)間及峰形相似度，分為6段進(jìn)行接樣，將這6段組分分別收集，盡快進(jìn)行濃縮（60℃旋蒸）及真空凍干，隨后測量其體外促睡眠活性；