[發(fā)明專(zhuān)利]基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111093853.0
• 申請(qǐng)日: 2021-09-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113804788A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳文亮;張曙光;銀霞;劉淑娟;童彤;黃靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖南省茶葉研究所（湖南省茶葉檢測(cè)中心）
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 黃宗波

1.基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1：構(gòu)建模型，將小鼠分為模型組、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，分別用不同的飼料進(jìn)行喂養(yǎng)；

S2：收集小鼠的血清，用于檢測(cè)血脂四項(xiàng)和血糖水平以及代謝組學(xué)分析；

S3：對(duì)收集到的小鼠血清進(jìn)行前處理，然后進(jìn)行UPLC-Q-TOF/MS檢測(cè)；

S4：數(shù)據(jù)處理，比較對(duì)照組與模型組，實(shí)驗(yàn)組與模型組，篩選出具有防治肥胖癥及肥胖代謝綜合癥作用機(jī)制的共同特異性生物標(biāo)記物；

S5：通過(guò)MetaboAnalyst在線分析軟件對(duì)上述步驟獲得的特異性生物標(biāo)記物進(jìn)行通路分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述實(shí)驗(yàn)組包括一年陳六堡茶實(shí)驗(yàn)組和十年陳六堡茶實(shí)驗(yàn)組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述S1步驟的模型組采用高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，一年陳六堡茶實(shí)驗(yàn)組、十年陳六堡茶實(shí)驗(yàn)組分別采用一年陳六堡茶干預(yù)高脂飼料、十年陳六堡茶干預(yù)高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，對(duì)照組采用普通飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述一年陳六堡茶干預(yù)高脂飼料、十年陳六堡茶干預(yù)高脂飼料分別為一年陳六堡茶提取物、十年陳六堡茶提取物和高脂飼料的混合物，所述高脂飼料包括63.6％普通飼料、20.0％蔗糖、15％豬油、1.2％膽固醇、0.2％膽酸鈉。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述一年陳六堡茶提取物、十年陳六堡茶提取物是將一年陳六堡茶、十年陳六堡茶回軟后，經(jīng)過(guò)變溫壓差膨化處理、提取、冷凍干燥后制得。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述S2步驟血清樣本收集為：最后一次給藥后禁食不禁水24h，麻醉后摘眼球取血，放入離心管中，4℃下靜置一段時(shí)間后，在4℃溫度下以3000r·min^-1的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心15min，離心后得到血清樣本，冷凍備用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述S3步驟的樣品前處理為：室溫下自然解凍血清樣本，渦漩震蕩5s，震蕩后取樣品和甲醇-乙腈溶液混合，渦漩震蕩3min，于4℃冰箱中過(guò)夜然后進(jìn)行蛋白質(zhì)沉淀，再將所有樣品在13000rpm，4℃條件下高速冷凍離心10min，并將上清液通過(guò)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述甲醇-乙腈溶液為甲醇和乙腈按照1:1的體積比混合而成。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF/MS檢測(cè)分析條件為：使用C18色譜柱，柱溫為35℃，流速為0.4mL/min，進(jìn)樣體積為5μL，流動(dòng)相由乙腈和0.1％甲酸、5mmol/L乙酸銨組成；所述UPLC洗脫條件為：0min，5％A；2min，30％A；6min，65％A；7.5min，80％A；12min，95％A；16min，5％A。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一權(quán)利要求所述的基于代謝組學(xué)的陳年六堡茶防治肥胖癥作用機(jī)理研究方法，其特征在于，所述S4步驟數(shù)據(jù)處理具體為：獲得的UPLC-QTOF/MS的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，獲得數(shù)據(jù)矩陣，將數(shù)據(jù)矩陣導(dǎo)入SIMCA-P14.0軟件，進(jìn)行無(wú)監(jiān)督主成分分析和監(jiān)督正交偏最小二乘判別分析，基于OPLS-DA分析的S-plot圖和VIP，識(shí)別和揭示差異代謝物。