[實用新型]小鼠聚集蛋白聚糖酶聯免疫吸附測定試劑盒

有效

• 申請號: 201220247321.8
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN202583198U
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 勵娟青
• 申請（專利權）人: 勵娟青
• 主分類號: G01N33/545
• 分類號: G01N33/545
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及生物技術領域，尤其涉及一種小鼠聚集蛋白聚糖酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑盒。

背景技術

聚集蛋白聚糖酶在關節軟骨破壞中起重要的作用，對聚集蛋白聚糖酶1和聚集蛋白聚糖酶-2的雙重抑制能布效防止關節軟骨的破壞。轉化生長因子-β、白介素-1、腫瘤壞死因子-α活化T細胞核因子、轉錄因子Runx、制瘤素M、1xB激酶抑制物、金屬蛋白酶抑制物、a2巨球蛋白、環孢素、雷公藤內酯、n-3脂肪酸和血小板反應蛋白結構域單元等。

聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)屬于帶有血小板反應蛋白結構域單元的裂解素和金屬蛋白酶家族，目前已經明確的聚集蛋白酶聚糖酶包括聚集蛋白聚糖酶-1(ADAMTS-4)、聚集蛋白聚糖酶-2(ADAMTS-5)和ADAMTS-8。聚集蛋白聚糖為關節軟骨細胞外基質(extracellular?matrix，ECM)的主要成分之一，通常認為基質金屬蛋白酶(matrix?metalloproteinases，MMPs)在關節軟骨的破壞中起決定性的作用。聚集蛋白聚糖的降解酶主要為MMPs和聚集蛋白聚糖酶。近年研究發現，在骨關節炎(osteoarthritis)軟骨破壞中，聚集蛋白聚糖酶引起的關節軟骨破壞比MMPs引起的聚集蛋白聚糖核心蛋白降解大約提前3周，同時抑制聚集蛋白聚糖酶-1和聚集蛋白聚糖酶-2能有效防止關節軟骨破壞。

基于小鼠關節炎模型的研究結果，證明無論在體內、體外實驗中，取出ADAMTS-5(聚集蛋白聚糖酶-2)活性都能對抗聚集蛋白聚糖降解與保護軟骨作用，而去除ADAMTS-4并不能終止軟骨的破壞。這兩項研究結果有力地支持了在關節炎疾病的軟骨破壞中，聚糖蛋白聚糖酶-2才是主要的聚集蛋白聚糖酶。

實用新型內容

本實用新型的目的是提供一種小鼠聚集蛋白聚糖酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括盒蓋、內部的酶標板和盒體，其中酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于：所述固相載體為設置有多個微孔的微孔板，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面。

優選的，上述固相載體為96孔聚苯乙烯試劑板。

優選的，上述包被層包被小鼠聚集蛋白聚糖抗體。

優選的，上述酶標板為透明酶標包被板。

優選的，上述固相載體為12孔×8條。

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被小鼠聚集蛋白聚糖(Agc)抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中小鼠聚集蛋白聚糖(Agc)濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中小鼠聚集蛋白聚糖(Agc)含量。

附圖說明

圖1是本實用新型酶標板結構示意圖；

圖2是本實用新型試劑盒結構示意圖。

圖中：1-固相載體；2-微孔；3-包被層；4-盒蓋；5-酶標板；6-盒體。

具體實施方式

下面結合附圖對本實用新型作進一步描述。

本實用新型提供的小鼠聚集蛋白聚糖酶聯免疫吸附測定試劑盒制備的主要的技術路線如下：

本試劑盒應用競爭抑制酶聯免疫分析法測定血清或血漿樣本中Agc的水平。制備過程如下：使用96孔聚苯乙烯試劑板(PS)作為固相載體，先將其置于紫外光下輻照2小時，使PS板活化。在試劑板微孔條上預先包被一定濃度的Agc，4℃過夜，經洗板及牛血清白蛋白封閉處理后制成包被好的酶標板。檢測時，依次加入待測標本及生物素化的Agc抗體，形成酶標板上包被的Agc和標本中的Agc競爭結合抗Agc抗體的局面，再通過親和素化辣根過氧化物酶(HRP)放大信號，以3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺(TMB)及硫酸分別作為底物及終止液，完成人Agc的ELISA試劑盒的制備。

ELISA試劑盒較RIA試劑盒有諸多優點，通過與Phoenix?Pharmaceuticals，Inc.生產的RIA試劑盒進行比較，可見其操作更簡單、無需特殊的實驗條件且對環境和操作人員影響小，適用于普通實驗室的應用。

ELISA試劑盒與RIA試劑盒比較結果如表1所示。

表1

本實用新型提供的小鼠聚集蛋白聚糖酶(Agc)ELISA試劑盒的特異性檢測。其他類似物的交叉反應率如表2所示：