[發明專利]一種基因工程高產豐加霉素的淀粉酶產色鏈霉菌及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202111055438.6
• 申請日: 2021-09-09
• 公開（公告）號: CN113801834B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 宋陽;申屠旭萍;俞曉平;張祥麗;張子軒
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/74;C12N15/66;C12P19/40;C12R1/525
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

1.一種基因工程高產豐加霉素的淀粉酶產色鏈霉菌，其特征在于，其為通過基因工程方法由質粒pIB139?和RelA基因構建重組質粒pIB139-RelA，并轉入淀粉酶產色鏈霉菌（Streptomyces?diastatochromogenes）1628中構建得到，所述豐加霉素高產粉酶產色鏈霉菌過量表達ppGpp合成酶RelA基因，所述RelA基因序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.一種權利要求1所述的基因工程高產豐加霉素的淀粉酶產色鏈霉菌的構建方法，其特征在于包括如下步驟：

1）以天藍色鏈霉菌基因組為模板，PCR擴增獲得含有NdeI和XbaI兩個酶切位點的RelA基因，所述RelA基因序列如SEQ?ID?No.1所示；

2）使用NdeI和XbaI酶切獲得RelA基因片段，與NdeI和XbaI雙酶切質粒pIB139進行連接，得到連接產物的重組質粒pIB139-RelA；轉入大腸桿菌感受態細胞，篩選轉化子保存；所述質粒pIB139是在pSET152質粒上，在多克隆位點添加紅霉素啟動子PermE*構建獲得；重組質粒pIB139-RelA為大腸桿菌和鏈霉菌穿梭質粒；

3）將重組質粒pIB139-RelA整合到淀粉酶產色鏈霉菌（Streptomyces?diastatochromogenes）1628染色體基因組，獲得基因工程高產豐加霉素的淀粉酶產色鏈霉菌。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于步驟1）中，PCR擴增的引物為RELA-F/RELA-D，其序列如下：

RELA-F：GGAATTCCATATGCCAGACGAGGCCCAGCCACTGACCG；

RELA-D：GCTCTAGACTAGGGGTCCTCGGTCTCCTTCTGCCAGTCG。

4.一種提高豐加霉素產量的方法，其包括如下步驟：

1）將權利要求1所述的基因工程高產豐加霉素的淀粉酶產色鏈霉菌菌接種在GYM培養基中，在25-37℃培養到產生分生孢子；

2）將孢子接種到GYM培養基培養基中，在25-37℃，150-200?rpm，培養24-30小時，將培養好的種子轉接到GYM培養基中發酵直到96?h，即可獲得豐加霉素母液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述GYM培養基的組成為：葡萄糖4?g/L，酵母提取物4?g/L，麥芽糖提取物4?g/L，酪蛋白提取物1?g/L，NaCl?2?g/L。