[發明專利]蘇丹黑B2染料及染色液、使用其的檢測方法、含有其的凝膠電泳體系、試劑盒及制備方法

有效

• 申請號: 202111029104.1
• 申請日: 2021-09-03
• 公開（公告）號: CN113462191B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 佘鵬;牛欽;張媛媛
• 申請（專利權）人: 上海淘源生物科技有限公司
• 主分類號: C09B43/00
• 分類號: C09B43/00;G01N1/30;G01N27/447
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫旭華

1.一種蘇丹黑B2染色液，其特征在于，包含如下所示結構的蘇丹黑B2染料，

。

2.一種權利要求1所述染色液的制備方法，其特征在于，包括下列步驟：

取濃度為質量體積比0.1-1.5%的權利要求1所述的蘇丹黑B2染料，將所述蘇丹黑B2加入到選自丙酮、丙二醇、異丙醇和乙二醇組合中的一種，以所述加入的丙酮或丙二醇或異丙醇或乙二醇的總體積計，其中含有的所述丙酮或丙二醇或異丙醇或乙二醇的體積百分比范圍為大于等于98.0%并小于等于99.3％；在其中加入體積比為0.5-1.5%的N,N-二甲基甲酰胺（N,N-Dimethylformamide, DMF）或1-甲基-2吡咯烷酮；

再在其中加入辛基酚類聚氧乙烯醚表面活性劑（Triton X-405）、聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）、吐溫三者中的一種作為表面活性劑，所述表面活性劑的使用體積比為0.05-0.5%；

將上述混合溶液充分混合后，避光保存，即獲得所述染色液。

3.一種脂蛋白亞分型定量檢測方法，其特征在于，所述脂蛋白亞分型包括極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）、低密度脂蛋白（low densitylipoprotein, LDL）及其1-7亞分型、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL），所述檢測方法按照下列步驟進行：

S01：采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對血清或血漿中的脂蛋白進行分離；

S02：將所述血清或血漿中的脂蛋白使用權利要求1所述的染色液或權利要求2所述制備方法制得的染色液染色后，取混合液30微升加入到凝膠柱上；

S03：在電泳槽中的電場作用下，經過聚丙烯酰胺凝膠分子篩效應，脂蛋白亞分型按照脂蛋白顆粒大小依次被分離開來；

S04：所述脂蛋白亞分型電泳分離的結果經電泳裝置的掃描系統得到脂蛋白電泳條帶的光密度圖譜；

S05：將所述光密度圖譜通過分析軟件轉換為峰型圖譜，并進行所述峰型圖譜中各峰型面積比例分析；

S06：根據檢測到的總膽固醇含量和所述各峰型面積的比例得到脂蛋白亞分型各組分的準確含量。

4.一種檢測試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的蘇丹黑B2染料或權利要求1所述的染色液或權利要求2所述制備方法制得的染色液。

5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括凝膠柱，所述凝膠柱分為上下兩層，其中，上層凝膠柱的濃度為2.7-3.0 wt%聚丙烯酰胺，下層凝膠柱的濃度為3.4-3.8 wt%聚丙烯酰胺，其中，所述聚丙烯酰胺包含丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺，所配制的凝膠液的主要組成成分為：丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羥甲基氨基甲烷（Trizmabase）、 N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）、過硫酸銨及蔗糖、Proclin300。

6.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述上層凝膠柱的使用體積為140-200μL，所述下層凝膠柱的使用體積為1.2-1.6 mL，所述三羥甲基氨基甲烷的使用量濃度為質量體積比0.2-2%，所述蔗糖的使用濃度為質量體積比0.5-2%，所述N,N,N',N'-四甲基乙二胺的使用濃度為體積比0.3-2%, 所述凝膠液的PH值為6.8±0.2，所述Proclin300的濃度為體積比0.05‰-5‰。

7.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括電泳緩沖體系。

8.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括質控品。

9.根據權利要求4-8任一項所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒應用權利要求3所述的脂蛋白亞分型定量檢測方法。