[發明專利]抗豬藍耳病的分子標記及其檢測試劑盒研發與應用

有效

• 申請號: 202111006066.8
• 申請日: 2021-08-30
• 公開（公告）號: CN113774144B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 劉榜;劉雯悅;周翔;吳清清;諶陽;高國麗;張慶德;官凱鋒
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明提供了抗豬藍耳病(PRRS)相關的SNP分子標記，屬于分子遺傳學領域，具體涉及豬EFL1基因第12內含子和DBNL基因第9內含子變異位點的分子標記檢測方法及其在抗豬藍耳病育種中的應用。所述抗豬藍耳病相關SNP標記的核苷酸序列如序列表SEQ?IDNO.1～NO.2所示。本發明提供了用于檢測抗豬藍耳病相關分子標記檢測試劑盒，即擴增EFL1和DBNL基因SNPs的檢測試劑盒。本發明提供的分子標記不受豬年齡、性別以及環境所限制，可在仔豬出生后檢測篩選抗病個體，實施早期選擇和抗病育種。

技術領域

本發明屬于分子遺傳學領域，具體涉及一種篩選抗豬藍耳病豬的育種方法，通過判斷豬EFL1基因第12內含子和DBNL基因第9內含子突變位點的多態性進行早期選擇，并應用該突變位點實現藍耳病抗病育種。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，PRRS)俗稱“藍耳病”，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine?Reproductive?andRespiratory?Syndrome?Virus,PRRSV)引起的一種以各年齡段豬呼吸障礙、母豬繁殖障礙和仔豬高死亡率為主要特征的高度傳染性疾病，對全球生豬養殖業造成巨大損失。目前，我國PRRS防控主要依賴于疫苗，然而當前PRRSV商業滅活疫苗大多是基于單個PRRSV病毒株，對具有高度變異的PRRSV感染并沒有很好的保護效力，而弱毒苗還會帶來疫苗毒株感染、毒力返強等潛在威脅。因此，從遺傳水平增強宿主對PRRS的抗病力，選育抗PRRS的優良品種，對于防控PRRSV大規模流行提供了一個研究途徑，為解決PRRS防控難題帶來了新希望。

病毒載量是病毒感染后宿主與病毒相互斗爭進而影響疾病進程的指標。感染PRRSV早期會對宿主產生免疫抑制，從而促進病毒大量繁殖，感染后期機體免疫應答與病毒的博弈決定著機體抗病性和個體存活能力，而抗病個體的免疫系統將抑制病毒增殖并使病毒載量逐漸降低，甚至完全被清除。發明人課題組前期發現通城豬與大白豬相比表現出較強的抗病力，通過人工感染PRRSV后發現兩品種在臨床癥狀、細胞因子水平、血常規指標、血清中的病毒載量等性狀中存在較大差異，病毒血癥最高值約為大白豬最高值的2/5(Liang等，Differences?of?immune?responses?between?Tongcheng(Chinese?local?breed)andLarge?White?pigs?after?artificial?infection?with?highly?pathogenic?porcinereproductive?and?respiratory?syndrome?virus.Virus?Res.2016?Apr?2；215:84-93.)。據此，發明人課題組以大白豬×通城豬高代橫交群體為研究對象，通過PRRSV人工感染，以感染后第14天個體存活情況劃分易感組和抗病組，結果表明抗病組的病毒載量在第4、7、11天均顯著低于易感組(P0.05)(高國麗等，HP-PRRSV人工感染后豬血清病毒載量和體重增長的變化規律[J].華中農業大學學報,2020,39(05):56-61.)。血液病毒載量高低能夠反映不同個體對PRRS抗病和易感程度，但其必須在病毒感染后才能檢測，如果能通過檢測免疫相關性狀的分子標記就可在疾病發生前篩選抗病個體，實施抗PRRS的早期選擇和抗病育種。因此本發明通過將SNP位點與豬感染PRRSV后不同時間點病毒載量性狀進行關聯分析，以期為豬抗病育種提供有效的分子標記。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明通過篩選豬抗PRRS的分子標記，并建立相應的檢測方法，為PRRS抗病育種提供有效的分子遺傳標記和技術方法。