[發(fā)明專利]靶向4-1BB的全人源抗體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111003372.6
• 申請日: 2021-08-30
• 公開（公告）號: CN113621065B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋波;陳青云;王小瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢海沙百得生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 武漢聚信匯智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42258
• 代理人: 劉丹

本發(fā)明涉及靶向4?1BB的全人源抗體及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。提供了兩種特異性結(jié)合人4?1BB的重組單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用，還提供了編碼所述抗體的核酸分子。本發(fā)明通過重組抗體技術(shù)，從噬菌體展示全人源抗體文庫中獲得了兩種能特異性結(jié)合人4?1BB、且具有較好的T細胞激活作用的抗體。所述抗體在制備通過激活4?1BB以增強機體免疫能力的腫瘤免疫治療藥物及聯(lián)合藥物開發(fā)方面有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及兩種靶向4-1BB的全人源抗體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

4-1BB又名CD137，是一種分子量約為30kDa的I型跨膜糖蛋白分子，屬于腫瘤壞死因子受體家族成員(TNFR)，由腫瘤壞死因子受體超家族成員9(TNFRSF9)基因編碼，是T細胞表面一種重要的激活型免疫檢查點分子。在T細胞和NK細胞等被激活后，4-1BB會有很高的表達，能夠活化細胞毒性T細胞和記憶T細胞，促進T細胞增殖和存活，有助于對腫瘤細胞進行殺傷。人4-1BB全長255個氨基酸，包含23aa信號肽(ss)、163aa的胞外區(qū)(ECD)、27aa的跨膜區(qū)域(187-213)和42aa的胞內(nèi)區(qū)域(ICD)。除了表達于CD4+和CD8+T細胞表面，4-1BB也可表達于NK細胞、NKT細胞、樹突狀細胞(DC)、Tregs和部分B細胞等。

4-1BB的配體為4-1BBL(又被稱為CD137L)，是一種TNF家族的II型跨膜蛋白分子，表達于各種活化的抗原遞呈細胞(APC)表面，如IFN-γ活化的巨噬細胞、CD40配體活化的B細胞、單核細胞、樹突狀細胞等。

4-1BB/4-1BBL是除CD28/B7之外的另一組重要的共刺激分子，為T細胞活化提供第二信號，它們的協(xié)同刺激信號主要作用于活化后期。4-1BB與4-1BBL作用模式屬于經(jīng)典的TNF-TNFR結(jié)合模式，三個4-1BB單體分子(mono-4-1BB)結(jié)合三聚體化的4-1BBL，達到成簇的目的，促進后續(xù)信號通路的傳導(dǎo)。采用激活型的抗體，也可以實現(xiàn)4-1BB成簇目的。這種結(jié)合可以導(dǎo)致TNFR相關(guān)因子TRAF1和TRAF2的快速招募，TRAF介導(dǎo)的NF-kB和MAPK細胞內(nèi)信號的激活導(dǎo)致T細胞分裂和增殖，增加細胞存活率，增強CD4+和CD8+T細胞的效應(yīng)器功能。此外，4-1BB還能夠刺激T細胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α等細胞因子，并通過與CD28共刺激分子的協(xié)同作用減少免疫調(diào)節(jié)因子IL-4和TGF-β的產(chǎn)生。

鑒于4-1BB對T細胞的激活的功能，開發(fā)4-1BB的激活型抗體可以激活T細胞，達到腫瘤免疫治療的目的。百時美施貴寶的Urelumab和輝瑞的Utomilumab兩種抗體在臨床研究階段的進展相對較快。Urelumab(BMS-663513)是一種IgG4單克隆抗體，有著令人鼓舞的抗腫瘤活性，但是顯示出較嚴重的副作用(肝臟毒性、血小板減少等)。Utomilumab(PF-05082566)是人源化IgG2單克隆抗體，比Urelumab的激動活性弱，具有良好的安全性，但是抗腫瘤活性相對較弱。因此，開發(fā)出安全性和有效性更好的4-1BB抗體，并在藥物設(shè)計和聯(lián)合用藥方面進一步探索，對通過調(diào)節(jié)機體免疫力的腫瘤治療具有積極意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供兩種靶向4-1BB的全人源抗體及其制備方法和應(yīng)用。

在一個方面，本發(fā)明涉及兩種分離的單克隆抗體(例如，人抗體)，或其抗原結(jié)合部分，其具有包含CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)的重鏈可變區(qū)，其中CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)包含與下述具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列

(1)分別為SEQ?ID?NO:1、2和3；或

(2)分別為SEQ?ID?NO:4、5和6；

其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合4-1BB。這些氨基酸序列可分別由SEQ?IDNO：17至22的核酸序列編碼。