[發明專利]一種分段式發酵制備畜禽抗病毒中草藥制劑的方法

有效

• 申請號: 202110997627.9
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113577161B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 李登云;柴保國;韓露;陳佩格;喬彬;崔俊亞;李小佳;申雅瓊
• 申請（專利權）人: 河南牧翔動物藥業有限公司;河南牧翔生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/756
• 分類號: A61K36/756;A61P1/14;A61P29/00;A61P31/12;A61P37/04;A61P39/02;C12N1/20;C12R1/10;C12R1/07;C12R1/25
• 代理公司: 鄭州豫開專利代理事務所(普通合伙) 41131
• 代理人: 張智偉

1.一種分段式發酵制備畜禽抗病毒中草藥制劑的方法，其特征在于，制備步驟如下：

（1）、以重量份計，稱取黃連20-25份、黃芩10-15份、黃柏15-20份、連翹10-15份，分別粉碎，備用；

（2）、發酵液制備：

（2.1）、將凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和植物乳桿菌分別活化后擴大培養，獲得對應的菌液；

（2.2）、將凝結芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、植物乳桿菌菌液按照（8.5-9.5）∶（1.8-2.2）∶1的體積比混合，獲得發酵培養液；

（3）、液態發酵：

（3.1）、提取工藝：將步驟（1）所得的黃芩粉和連翹粉放入水中浸潤至少30 min，隨后煮沸攪拌提取至少1 h，再離心過濾，獲得中藥提取液和藥渣；

（3.2）、將步驟（2.2）所得發酵培養液和步驟（3.1）所得中藥提取液按照1∶（3-5）的體積比加入發酵罐中，再向發酵罐中加入復合培養基，發酵培養液和中藥提取液的總量與復合培養基的體積比為（0.5-1.5）∶100，在攪拌速率50-80 rpm、通氣量1.5-2.5 vvm條件下發酵48-72 h，獲得液體發酵液；所述復合培養基的組成為：牛肉膏0.8-1.2 g/L、蛋白胨8-12 g/L、酵母浸出物4-6 g/L、葡萄糖18-22 g/L、NaCl 4-6 g/L、檸檬酸三銨4-6 g/L、碳酸氫鉀1-3 g/L、吐溫-80 0.5-1.5 g/L、七水硫酸鎂0.1-0.3 g/L、硫酸錳0.04-0.06 g/L，余量為水；

（4）、固態發酵：

（4.1）、將步驟（3.1）所得藥渣與步驟（1）所得黃連粉、黃柏粉混合；

（4.2）、將步驟（3.2）所得液體發酵液和步驟（4.1）所得固體混合物按照1∶（3-5）的質量比進行混合，均勻混合后分裝到帶有單向排氣閥的發酵袋中密封，30-32 ℃發酵48-72 h，即得目標產物--畜禽抗病毒中草藥制劑。

2.如權利要求1所述的分段式發酵制備畜禽抗病毒中草藥制劑的方法，其特征在于：步驟（1）中，粉碎至40-80目。

3.如權利要求1所述的分段式發酵制備畜禽抗病毒中草藥制劑的方法，其特征在于：步驟（2.1）中，凝結芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液和植物乳桿菌菌液分別按照下述過程制備獲得：

凝結芽孢桿菌菌液和地衣芽孢桿菌菌液的制備：將保存的凝結芽孢桿菌/地衣芽孢桿菌接種到種子斜面培養基中，35-37 ℃活化培養24-48 h ；然后將活化的培養液按體積比（0.5-1.5）∶100接種到基礎發酵培養基中，35-37 ℃、150-200 r/min震蕩擴大培養24-48 h后，制得凝結芽孢桿菌菌液/地衣芽孢桿菌菌液；所述種子斜面培養基的組成為：蛋白胨8-12 g/L、牛肉膏14-16 g/L、氯化鈉14-16 g/L、瓊脂16-20 g/L，余量為水；基礎發酵培養基的組成為：蛋白胨8-12 g/L、牛肉膏14-16 g/L、氯化鈉14-16 g/L，余量為水；

植物乳桿菌菌液的制備：將保存的植物乳桿菌接種到MRS培養基中，35-37 ℃、150-200r/min震蕩活化培養24-48 h；然后將活化的培養液按體積比（0.5-1.5）∶100接種到MRS培養基中，35-37 ℃、150-200 r/min震蕩擴大培養24-48 h后，制得植物乳桿菌菌液。