[發(fā)明專利]一種檢測阪崎腸桿菌的新方法、應(yīng)用及檢測試劑盒

有效

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• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113433253B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董志珍;趙良娟;王洪彬;王玉迎;趙宏;龐路;宓捷波;袁兆霆;于敏;趙化冰;王淞
• 申請（專利權(quán)）人: 天津海關(guān)動植物與食品檢測中心;天津科技大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/72;C12Q1/04
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

1.一種基于組合特征肽的靶向分析檢測阪崎腸桿菌的檢測方法，其特征在于：所述方法通過分析以下特征肽檢測樣品中的阪崎腸桿菌：

I1：SEQ ID NO.1；

I2：SEQ ID NO.2；

I3：SEQ ID NO.3；

I4：SEQ ID NO.4；

所述特征肽中I1、I2、I3、I4中任意檢出≥2條，則可判定樣品中阪崎腸桿菌陽性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于組合特征肽的靶向分析檢測阪崎腸桿菌的檢測方法，其特征在于：采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)對阪崎腸桿菌的組合特征肽進(jìn)行檢測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于組合特征肽的靶向分析檢測阪崎腸桿菌的檢測方法，其特征在于：采用LC-ESI/QQQ MRM模式進(jìn)行檢測。

4.如權(quán)利要求1至3任一項所述的基于組合特征肽的靶向分析檢測阪崎腸桿菌的檢測方法在阪崎腸桿菌檢測方面中的應(yīng)用。

5.一種基于組合特征肽的阪崎腸桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括如下阪崎腸桿菌的組合特征肽：

I1：SEQ ID NO.1（LTPTILR）；

I2：SEQ ID NO.2（NANDGISLVQTAEGNLNEINTNLQR）；

I3：SEQ ID NO.3（AVVAAVEELK）；

I4：SEQ ID NO.4（LADVLAAAEAR）。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于組合特征肽的阪崎腸桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括阪崎腸桿菌增菌液、生理鹽水、Buffer 1、Buffer 2、胰蛋白酶、甲酸、特征肽標(biāo)準(zhǔn)品；所述Buffer 1為含10 mM二硫蘇糖醇的50 mM碳酸氫銨溶液；所述Buffer 2為含0.5 M碘乙酰胺的50 mM碳酸氫銨溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的基于組合特征肽的阪崎腸桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的檢測方法包括如下步驟：

菌體收集及樣品前處理：通過離心收集菌體，使用生理鹽水洗滌沉淀2次，在菌體沉淀中加入0.5 ml Buffer 1，混勻后超聲破碎10 min；隨后，加入100 μL的Buffer 2迅速混勻，避光反應(yīng)15min；隨后加入4 μL胰蛋白酶，在50 ℃的水浴鍋中進(jìn)行消化15 min；加入0.5 μL甲酸終止胰蛋白酶消化，直接分析樣品或在-20 ℃下儲存直至分析；

LC-ESI/QQQ分析：先使用非靶向模式分析特征肽標(biāo)準(zhǔn)品，確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)肽的保留時間和特征碎片，然后通過多反應(yīng)監(jiān)測模式MRM靶向檢測樣品中的特征肽；

阪崎腸桿菌污染鑒定方法：若特征肽組合I1、I2、I3、I4中任意檢出≥2條，則可判定樣品阪崎腸桿菌陽性。