[發明專利]戊二酸尿癥1型檢測裝置、尿液有機酸含量檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110989334.6
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113777188A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 吳本清;楊江濤;趙明;黃麗娟;孫智勇;戴子鵬
• 申請（專利權）人: 深圳愛灣醫學檢驗實驗室
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 深圳市六加知識產權代理有限公司 44372
• 代理人: 李于明

1.一種尿液有機酸含量檢測方法，其特征在于，包括：

建立待檢測有機酸的標準曲線，所述待檢測有機酸包括：戊二酸、3-羥基戊二酸以及戊烯二酸；

確定所述待檢測有機酸的特征離子；

去除尿液樣品中的尿素；

對所述尿液樣品進行肟化反應；

在所述肟化反應后，萃取所述尿液樣品中的有機酸；

使用氮氣吹干萃取液，獲得有機酸樣本；

對所述有機酸樣本進行硅烷化反應；

通過氣相色譜-質譜聯用法，定量檢測所述有機酸樣本中待檢測有機酸的含量；其中，質譜的掃描模式為“單離子檢測”的特征離子掃描模式。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述去除尿液樣品中的尿素，具體包括：

取1ml尿液樣品；

在所述尿液樣品中，加入40ul尿素酶并充分震蕩；

在37℃的條件下，靜置30分鐘；

加入960ul超純水定容至2ml。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述對所述尿液樣品進行肟化反應，具體包括：

向定容至2ml的尿液樣品加入1ml，5％鹽酸羥胺并充分搖勻；

在20-26℃的溫度下，反應20分鐘；

加入550ul純鹽酸后密封、避光保存直至檢測到pH值為3。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述萃取所述尿液樣品中的有機酸，具體包括：

向所述肟化反應后的尿液樣品加入3ml乙酸乙酯并振蕩混勻；

在振蕩混勻后，以預設的離心轉速進行離心；

獲取離心后的上清液。

5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述萃取所述尿液樣品中的有機酸，具體包括：

對所述肟化反應后的尿液樣品進行兩次或以上的離心萃取操作；

合并每次離心萃取操作獲得的上清液。

6.根據權利要求4或5所述的檢測方法，其特征在于，所述對所述有機酸樣本進行硅烷化反應，具體包括：

在氮氣吹干后的有機酸樣本中加入100ul硅烷化試劑，在恒溫70℃下，反應30分鐘；所述硅烷化試劑為BSTFA:TMCS(99:1)。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述氣相色譜的工作條件具體如下：

進樣方式：分流模式；

分流比：10:1

進樣口溫度：280℃；

升溫程序：140℃保持1分鐘，以6℃/分鐘的升溫速率升至200℃，保持2分鐘；

流量控制模式：恒線速度。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述質譜的工作條件具體如下：

離子源溫度：200℃；

接口溫度：280℃；

采樣方式：單離子檢測；

間隔：0.30s；

掃描速度：1000；

采集質荷比：261；158；259；230；349；259。

9.如權利要求1-8任一項所述的尿液有機酸含量檢測方法在戊二酸尿癥1型檢測中的應用。

10.一種戊二酸尿癥1型的檢測裝置，其特征在于，包括：

存儲器，用于存儲記錄，戊二酸、3-羥基戊二酸以及戊烯二酸的標準曲線；

樣品處理試劑盒，包括若干種試劑，所述樣品處理試劑盒用于：去除尿液樣品中的尿素；對所述尿液樣品進行肟化反應；在所述肟化反應后，萃取所述尿液樣品中的有機酸；使用氮氣吹干萃取液，獲得有機酸樣本；對所述有機酸樣本進行硅烷化反應；

氣相色譜-質譜設備，用于通過氣相色譜-質譜聯用法，定量檢測所述有機酸樣本中待檢測有機酸的含量；

其中，質譜的掃描模式為“單離子檢測”的特征離子掃描模式。