[發(fā)明專利]新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒及新型冠狀病毒的核酸檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110984054.6 | 申請日： | 2021-08-25 |
| 公開（公告）號： | CN114990258A | 公開（公告）日： | 2022-09-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡萍;施劍林;余治國 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院上海硅酸鹽研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/682;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海瀚橋?qū)＠硎聞?wù)所(普通合伙) 31261 | 代理人： | 曹芳玲;鄭優(yōu)麗 |
| 地址： | 200050 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 新型 冠狀病毒 核酸 檢測 試劑盒 方法 | ||
本發(fā)明涉及新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒及新型冠狀病毒的核酸檢測方法。所述新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒包括：PNA探針溶液；用于修飾PNA探針的氨基化的磁性納米顆粒膠體；DNA探針溶液；用于修飾DNA探針的Au納米顆粒膠體；以及病毒保存液。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒及新型冠狀病毒的核酸檢測方法，屬于醫(yī)療臨床上新型冠狀肺炎診斷的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
新型冠狀病毒肺炎(COVID-19、或稱SARS-CoV-2等)，是以發(fā)熱干咳等癥狀為主要表現(xiàn)的急性呼吸系統(tǒng)疾病。該病毒主要會導(dǎo)致患者出現(xiàn)發(fā)熱、乏力、干咳等初期癥狀，隨后表現(xiàn)為呼吸困難，嚴重者出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征以及代謝性酸中毒等。另外，現(xiàn)有的一些呼吸道病原體諸如急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)等等，它們同樣威脅人類健康安全。
新型冠狀病毒是一種RNA病毒，即遺傳物質(zhì)是RNA(核糖核酸)，病毒蛋白衣殼將RNA包裹在其中。目前新型冠狀病毒的檢測方法一般為核酸檢測，方法主要采用實時熒光PCR法，這種方法的優(yōu)勢是特異性好且準(zhǔn)確率較高，但是該方法操作復(fù)雜，檢測時間較長，實驗條件苛刻需要專門實驗室。其次，還有基于膠體金法快速篩查冠狀病毒的檢測試紙，雖然該方法的檢測時間可縮短到十分鐘，然而通常而言，膠體金法的敏感度和特異性相對于核酸檢測更弱，很難將新型冠狀病毒和其他冠狀病毒鑒別出來。
發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是采用一種無核酸擴增的信號放大方法。具體來說，本發(fā)明提供了一種新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒及新型冠狀病毒的核酸檢測方法。
一方面，本發(fā)明提供了一種新型冠狀病毒的核酸檢測試劑盒，包括： PNA探針溶液；
用于修飾PNA探針的氨基化的磁性納米顆粒膠體；
DNA探針溶液；
用于修飾DNA探針的Au納米顆粒膠體；
以及病毒保存液。
本發(fā)明中，首先制備(ZnMn)Fe2O4@SiO2磁性納米顆粒和金納米顆粒；使用兩段分別于新冠病毒核酸核殼蛋白基因互補的肽核酸探針和核酸探針，并修飾于兩種納米顆粒表面，制備得雙納米顆粒探針。配置一系列濃度梯度新冠病毒核殼蛋白基因的標(biāo)準(zhǔn)溶液，雙納米顆粒探針在新冠病毒核殼蛋白基因存在時，與核殼蛋白基因發(fā)生耦合，經(jīng)過多次磁分離得到分離產(chǎn)物，根據(jù)電感耦合等離子發(fā)射光譜質(zhì)譜儀測定磁分離產(chǎn)物的金元素濃度，從而得到金元素和新冠病毒核殼蛋白基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。對待測溶液測定時，雙納米顆粒探針加入待測溶液反應(yīng)后磁分離，分離產(chǎn)物通過電感耦合等離子發(fā)射光譜質(zhì)譜儀測定金元素濃度，根據(jù)金元素和新冠病毒核殼蛋白基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算確定待測樣品中新冠病毒核酸濃度來達到檢測目的。
本發(fā)明中，PNA探針和DNA探針的序列可根據(jù)不同新冠病毒的堿基對進行設(shè)計(例如COVID-19或其變異德爾塔株、以及現(xiàn)有的SARS-CoV-2、SARS-CoV、MERS-CoV等都同樣適用)。如果新型冠狀病毒發(fā)生變異，重新設(shè)計探針序列就行。例如，所述PNA探針的序列包括：Cys-Gly-AA TCTG TCAA；所述DNA探針的序列包括： AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTGCAGCAGCAA。
較佳的，所述PNA探針用量為6～15nmol。
較佳的，所述DNA探針用量為25～40nmol。
較佳的，所述氨基化的磁性納米顆粒膠體中磁性納米顆粒的組成為Zn0.4Mn0.6Fe2O4@SiO2，濃度為0.1～0.5mg/mL，粒徑范圍為25nm～40nm。
較佳的，所述Au納米顆粒膠體的濃度為0.02～0.1mg/mL，Au納米顆粒的粒徑范圍為3nm～10nm。
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