[發明專利]將核酸固定于固相基質表面的方法以及從液相組合物中分離物質的方法

有效

• 申請號: 202110977481.1
• 申請日: 2021-08-24
• 公開（公告）號: CN113802188B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 董鳴;林至誠
• 申請（專利權）人: 生物島實驗室
• 主分類號: C40B50/18
• 分類號: C40B50/18;C40B40/06;G01N33/53;G01N33/569
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 袁薈

本發明涉及生物檢測技術領域，具體而言，涉及一種將核酸固定于固相基質表面的方法以及從液相組合物中分離物質的方法。該方法包括：a)將含有待固定核酸的溶液附著在所述固相基質的表面；b)對所述固相基質的表面進行照射以使得所述待固定核酸與所述固相基質的表面發生光交聯；其中，所述溶液中含有3M～4M的異硫氰酸胍。高濃度的異硫氰酸胍能夠有利于核酸分子在光交聯過程中分散更加均勻，從而可以有效提高固定后核酸的生物學活性。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體而言，涉及一種將核酸固定于固相基質表面的方法以及從液相組合物中分離物質的方法。

背景技術

在現代分子生物學和醫學中，生物芯片、生物學微陣列、固定有核酸(特別是適配體)的微珠已經成為重要的工具。

這些技術中的一些的關鍵是在載體或材料上有效地固定化核酸。在載體上固定化核酸的經典的方法是運用紫外光，即紫外交聯。Church和Gilbert在1984年描述了運用波長為254nm的紫外光導致DNA片段固定化到尼龍濾膜上(Church和Gilbert，PNAS，1984，81，p:1991-1995)。這種方法的改進版本是由Saiki等人.，PNAS，1989,86,p:6230-6234提出的，其描述了當使用波長為254nm的紫外光時包含多聚脫氧胸腺嘧啶(poly(dT))尾的寡核苷酸可以更容易地被固定到膜上。此效果歸結于光激活的胸腺嘧啶堿基更有效的結合到膜上。

但是，這種固定存在核酸在固定時分布不均的問題，因而會導致部分區域核酸分布稀釋甚至無核酸，另外一部分區域則會形成核酸堆疊聚集的情況，導致核酸的生物學性能的發揮受到影響。

發明內容

本發明的第一方面涉及一種將核酸固定于固相基質表面的方法，包括：

將含有待固定核酸的溶液附著在所述固相基質的表面；

對所述固相基質的表面進行照射以使得所述待固定核酸與所述固相基質的表面發生光交聯；

其中，所述溶液中含有3M～4M的異硫氰酸胍(Guandine thiocyanate,GuTc)。

可選的，所述待固定核酸預先與一段單鏈的tag核酸序列連接并通過所述tag核酸序列與所述固相基質的表面發生光交聯。

可選的，所述tag序列包含PolyT和/或PolyC序列。

可選的，所述tag序列為8～12個連續的T和8～12個連續的C相連所得序列。

可選的，所述溶液中還含有鹽離子；

可選的，所述鹽離子為0.3M～0.7M的鈉和/或鉀離子；

可選的，所述溶液的pH為6～8。

可選的，所述溶液中還含有緩沖組分。

可選的，所述緩沖組分為15mM～25mM的Tris-HCl。

可選的，所述溶液的溶劑為水。

可選的，可選的，步驟a)之后步驟b)之前還還包括，將附著有溶液的所述固相基質與乙醇共混，其中所述溶液和乙醇的體積比為1：(0.8～1.2)。

可選的，所述待固定核酸在所述溶液中的濃度0.1μM～0.7μM。

可選的，所述待固定核酸是DNA、RNA、PNA、CNA、HNA、LNA或ANA，或其組合。

可選的，所述待固定核酸是單鏈的或者雙鏈的。

可選的，所述固相基質的材質包括紙、硝酸纖維素、玻璃和塑料中的一種或多種。

可選的，所述固相基質為多孔板、膜、微珠中的至少一種。