[發明專利]將核酸固定于固相基質表面的方法以及從液相組合物中分離物質的方法

有效

• 申請號: 202110977481.1
• 申請日: 2021-08-24
• 公開（公告）號: CN113802188B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 董鳴;林至誠
• 申請（專利權）人: 生物島實驗室
• 主分類號: C40B50/18
• 分類號: C40B50/18;C40B40/06;G01N33/53;G01N33/569
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 袁薈

1.將核酸固定于固相基質表面的方法，其特征在于，包括：

a）將含有待固定核酸的溶液附著在所述固相基質的表面；

b）對所述固相基質的表面進行照射以使得所述待固定核酸與所述固相基質的表面發生光交聯；

其中，所述溶液中含有3M ~4M的異硫氰酸胍。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸預先與一段單鏈的tag核酸序列連接并通過所述tag核酸序列與所述固相基質的表面發生光交聯。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述tag核酸序列包含PolyT和/或PolyC序列。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述tag核酸序列為8~12個連續的T和8~12個連續的C相連所得序列。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶液中還含有鹽離子。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述鹽離子為0.3M~0.7M的鈉和/或鉀離子。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述溶液的pH為6~8。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述溶液中還含有緩沖組分。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述緩沖組分為15m M ~ 25 mM的Tris-HCl。

10.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述溶液的溶劑為水。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，步驟a）之后步驟b）之前還包括，將附著有溶液的所述固相基質與乙醇共混，其中所述溶液和乙醇的體積比為1：（0.8~1.2）。

12.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸在所述溶液中的濃度0.1μM ~ 0.7 μM。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸是DNA、RNA、PNA、CNA、HNA、LNA或ANA，或其組合。

14.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸是單鏈的或者雙鏈的。

15.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相基質的材質包括紙、硝酸纖維素、玻璃、磁性材料和塑料中的一種或多種。

16.根據權利要求15所述的方法，其特征在于，所述固相基質為多孔板、膜、微珠中的至少一種。

17.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述光交聯所使用的光的波長為250 nm~260 nm。

18.根據權利要求1~17任一項所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸是適配體。

19.根據權利要求18所述的方法，其特征在于，所述待固定核酸是能夠特異性識別并結合外泌體表面標志物的適配體。

20.根據權利要求19所述的方法，其特征在于，所述表面標志物選自CD63、CD9、CD81、HSP70、Tsg101、EpCam、flotillin、Syntenin、Alix、HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5以及a-1AT中的至少一種。

21.由權利要求1~20任一項所述方法固定得到的負載有核酸的固相基質。