[發明專利]一種BCR-ABL基因融合檢測的校準品和參考品的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202110962099.3
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113667751A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 程雪濤;王潔;張亞飛
• 申請（專利權）人: 邁杰轉化醫學研究（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 邊人洲

本發明提供了一種BCR?ABL基因融合檢測的校準品和參考品的制備方法及其應用，方法包括：分別制備ABL野生型裝甲RNA和BCR?ABL融合型裝甲RNA；使用保護稀釋液分別對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR?ABL融合型裝甲RNA進行溶解；通過數字PCR對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR?ABL融合型裝甲RNA的濃度進行檢測；使用保護稀釋液對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR?ABL融合型裝甲RNA進行梯度稀釋，得到校準品；將ABL野生型裝甲RNA校準品和BCR?ABL融合型裝甲RNA校準品按比例混合，得到參考品。制得的校準品和參考品與WHO一級標準品溯源性好，結果準確。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種BCR-ABL基因融合檢測的校準品和參考品的制備方法及其應用。

背景技術

慢性髓系白血病(CML)是一種以中晚幼粒細胞惡性增殖為特征的疾病，約90％～95％的CML患者中可檢測到BCR-ABL融合基因(即9號染色體上的ABL基因易位到22號染色體上的BCR基因上形成融合基因)，可用于CML的分型診斷、療效評價，以及作為微小殘留病的檢測和預后評估的可靠指標。

目前，臨床常用檢測方法包括常規染色體分析、熒光原位雜交(FISH)和熒光定量PCR。NCCN指南推薦CML患者達到CCyR(完全細胞學緩解)后應該每三個月進行一次BCR-ABL熒光定量PCR檢測，用來監測殘留白血病細胞有否上升、下降或處于穩定狀態。

目前，BCR-ABL熒光定量PCR檢測已國際標準化，考慮到實驗的不同條件(如不同的參考基因、PCR引物、提取方法及熒光定量PCR體系、反轉錄體系等)的差異，各實驗室的檢測結果需和WHO一級標準品進行比對，并建立轉換系數(CF)，從而將BCR-ABL的定量結果轉換成國際標準值(IS)。

然而，WHO一級標準品貨期漫長，手續繁多，且經過提取后獲得的RNA量很少，不能滿足企業的研發、驗證及質檢的需求。此外，現有技術往往不能與WHO一級參考品進行溯源，定量結果缺乏可靠性；或即使能溯源，但和理論值差異較大；或不同的參考品制備批次間存在較大的批間差異，不能保持良好的一致性。

因此，如何提供一種容易獲取的校準品及參考品，可以用于試劑的研發、驗證及質檢中，已成為亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供一種BCR-ABL基因融合檢測的校準品和參考品的制備方法及其應用，制備得到的校準品和參考品具有良好的擴增效率，批間差異小，可以與WHO一級標準品進行很好的溯源，校正系數十分接近1.0(即檢測值等同于理論值)，應用價值極高。

為達此目的，本發明采用如下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種BCR-ABL基因融合檢測的校準品和參考品的制備方法，所述制備方法包括：

分別制備ABL野生型裝甲RNA和BCR-ABL融合型裝甲RNA；

使用保護稀釋液分別對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR-ABL融合型裝甲RNA進行溶解；

通過數字PCR對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR-ABL融合型裝甲RNA的濃度進行檢測；

使用保護稀釋液對所述ABL野生型裝甲RNA和BCR-ABL融合型裝甲RNA進行梯度稀釋，得到校準品；將ABL野生型裝甲RNA校準品和BCR-ABL融合型裝甲RNA校準品按比例混合，得到參考品。

本發明中，選用裝甲RNA用于制備校準品及參考品，可以與WHO一級標準品在核酸層面保持一致；加入保護稀釋液，可以提高并穩定反應的擴增效率，減少或消除批間差異；選用數字PCR進行檢測，對于裝甲RNA的定量檢測更準確；制備得到的校準品和參考品能夠與WHO一級標準品進行很好的溯源，校正系數十分接近1.0。