[發明專利]一種檢測Sf9細胞DNA含量的方法在審
| 申請號： | 202110926897.0 | 申請日： | 2021-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN114075594A | 公開（公告）日： | 2022-02-22 |
| 發明（設計）人： | 李炯;魏霞蔚;魏于全;楊莉;王瑋 | 申請（專利權）人： | 四川大學華西醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 sf9 細胞 dna 含量 方法 | ||
1.一種用于檢測Sf9細胞DNA殘留的PCR引物對，其特征在于：所述引物采用GenBank登錄號為MN385596.1的核苷酸序列設計特異性引物。
2.根據權利要求1所述的引物對，其特征在于：所述引物對序列如SEQ ID NO.1～2所示。
3.一種用于檢測Sf9細胞DNA殘留的反應體系，其特征在于：所述反應體系為實時熒光定量PCR反應體系，包含如權利1或2所述的引物對；所述反應體系還包括Taq酶和DNA模板。
4.一種用于檢測Sf9細胞DNA殘留的方法，其特征在于：所述方法為實時熒光定量PCR檢測方法，包括使用權利要求1或2所述的引物進行序列擴增的步驟。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR法使用如權利要求3所述的反應體系進行反應。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR的反應程序為：95℃預變性5s；95℃變性5s，60℃退火30s，40個循環。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：該方法還包括：熒光定量PCR檢測已知濃度的Sf9細胞DNA標準品的熒光信號，繪制標準曲線；根據所獲得的標準曲線，計算得到待檢樣品中Sf9細胞DNA量。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法的檢測樣品為Sf9細胞參與生產的蛋白或代謝產物產品；
優選地，所述產品為蛋白藥物、重組疫苗或單克隆抗體。
9.一種用于檢測Sf9細胞DNA殘留的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括Taq酶、引物對、標準品、陰性質控品；所述引物對為采用GeneBank登錄號為MN385596.1的核苷酸序列設計的特異性引物；所述陰性質控品為無核酸酶水。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于：所述引物對為SEQ ID NO.1～2所示的PCR引物對。
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