[發(fā)明專利]基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110912116.2
• 申請(qǐng)日: 2021-08-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113403389A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳文亞;毛倫林;季莉莉;馬愛(ài)金;劉志清;王利惠;張金;王佳佳;黃婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 常州市武進(jìn)人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 濟(jì)南市新圖新夏天專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37330
• 代理人: 陳體芝

本發(fā)明涉及血小板技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法，包括以下步驟：S1、藥物基因檢測(cè)；S2、全血基因組DNA測(cè)序；S3、進(jìn)行代謝型分類；S4、TEG檢測(cè)；S5、結(jié)果分析，本發(fā)明中，根據(jù)藥物基因多態(tài)性聯(lián)合TEG指導(dǎo)輕型缺血性卒中抗血小板治療能有效降低90d內(nèi)新發(fā)卒中風(fēng)險(xiǎn)，且不會(huì)增加出血風(fēng)險(xiǎn)。基因檢測(cè)聯(lián)合TEG可及時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)抗血小板藥物治療不敏感的患者，能為抗血小板治療藥物的選擇提供新的依據(jù)，使缺血性卒中患者能更加精準(zhǔn)、合理地選擇抗血小板藥物，從而制定個(gè)體化的抗血小板治療方案，有效降低卒中復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于缺血性卒中二級(jí)預(yù)防具有重要的指導(dǎo)意義，值得臨床推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血小板技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

輕型缺血性卒中患者發(fā)生后續(xù)卒中的短期風(fēng)險(xiǎn)很高，極有可能導(dǎo)致殘疾，尤其是在卒中后的前90d。CHANCE研究發(fā)現(xiàn)輕型缺血性卒中或短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）后24h內(nèi)給予阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷治療21d比單獨(dú)使用阿司匹林能夠降低32%卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，并且未增加出血的并發(fā)癥。POINT研究的二次分析也證實(shí)在發(fā)病以后的前21d使用雙抗治療降低缺血性事件的獲益最大，而21d后繼續(xù)使用雙抗治療則獲益將被增加的出血風(fēng)險(xiǎn)抵消。因此，目前國(guó)內(nèi)外指南均推薦對(duì)未曾接受阿替普酶靜脈溶栓的非心源性輕型缺血性卒中患者，應(yīng)盡早啟動(dòng)阿司匹林和氯吡格雷雙聯(lián)抗血小板治療并維持21d。然而，有文獻(xiàn)報(bào)道3%～85%服用阿司匹林及4%～30%服用氯吡格雷的患者，即使長(zhǎng)期規(guī)律服藥，仍有腦卒中復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，臨床預(yù)后并沒(méi)有得到改善，這可能與患者對(duì)抗血小板藥物的反應(yīng)性降低有關(guān)。有學(xué)者將這種患者對(duì)抗血小板藥物反應(yīng)性降低的現(xiàn)象，稱為“抵抗”。阿司匹林抵抗（aspirinresistance，AR）、氯吡格雷抵抗（clopidogrelresistance，CR）是預(yù)防和治療部分缺血性卒中失敗的重要原因，并將大大增加缺血性卒中的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。有關(guān)AR及CR發(fā)生的機(jī)制比較復(fù)雜，目前尚不十分明確，以往的研究顯示抗血小板藥物代謝及作用過(guò)程中涉及的相關(guān)基因多態(tài)性可能是一個(gè)重要因素。目前，國(guó)內(nèi)尚無(wú)根據(jù)國(guó)人狀況的個(gè)體化、標(biāo)準(zhǔn)化的抗血小板治療體系。血小板抑制作用因人而異，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化抗血小板治療是抗栓治療急需研究解決的問(wèn)題。

因此，我們提出了一種基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法用于解決上述問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法。

基于藥物基因多態(tài)性及血栓彈力圖的血小板治療指導(dǎo)方法，包括以下步驟：

S1、藥物基因檢測(cè)：通過(guò)PCR和Sanger法測(cè)序技術(shù)檢測(cè)阿司匹林和氯吡格雷相關(guān)的基因多態(tài)性位點(diǎn)；

S2、全血基因組DNA測(cè)序：取靜脈血2ml于EDTA 抗凝管中，利用全血基因組DNA提取試劑盒來(lái)提取DNA，再將提取的DNA進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，最后將擴(kuò)增產(chǎn)物使用測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序；

S3、進(jìn)行代謝型分類：根據(jù)基因型進(jìn)行代謝型分類，分為強(qiáng)代謝型和弱代謝型；

S4、TEG 檢測(cè)：使用 TEG5000 型凝血分析儀對(duì)肘靜脈血進(jìn)行分析，2h 內(nèi)檢測(cè) AA途徑誘導(dǎo)的血小板抑制率（AA%）和 ADP 受體途徑誘導(dǎo)的血小板抑制率（ADP%）；

S5、結(jié)果分析：AA 抑制率＜50%，定義為 AR；ADP 抑制率＜30%，定義為 CR。

優(yōu)選的，所述S1中，阿司匹林相關(guān)基因檢測(cè)COX-1（AG）、ITGB3（TC）基因，其中G、C為阿司匹林抵抗相關(guān)等位基因；氯吡格雷相關(guān)基因檢測(cè)CYP2C19基因*2（681G/A）、*3（636G/A）、*17（-806C/T）。

優(yōu)選的，所述S2中，DNA測(cè)序前經(jīng)過(guò)酶切反應(yīng)，酶切反應(yīng)條件：變性：94℃，5min，94℃，30s；退火：56℃，20s；延伸：72℃，20s；

共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min。