[發(fā)明專利]一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110896170.2
• 申請(qǐng)日: 2021-08-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113604452A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉孟軍;劉志國(guó);袁野
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/14
• 分類號(hào): C12N9/14;C12N9/16;C12N9/88;C12N15/55;C12N15/60
• 代理公司: 北京圣州專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11818
• 代理人: 劉巖

本發(fā)明公開(kāi)了一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列，編碼三磷酸腺苷隧道金屬酶的基因?yàn)閆jAC2，ZjAC2具有如序列表中SEQ ID NO.1的DNA序列。本發(fā)明采用上述的一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列，編碼的蛋白除腺苷酸環(huán)化酶活性外，還具備N(xiāo)TP水解酶活性、三聚磷酸酶活性以及較弱的焦磷酸酶活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及三磷酸腺苷隧道金屬酶技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列。

背景技術(shù)

三磷酸腺苷隧道金屬酶(Triphosphate tunnel metalloenzymes，TTMs)超家族是由一組具有水解多種三聚磷酸鹽能力的蛋白組成，在生物中普遍存在。該蛋白超家族的催化特征為：底物均為三磷酸底物，需要二價(jià)金屬輔離子才能發(fā)揮酶活性。并且，該蛋白超家族的結(jié)構(gòu)相似，所有的TTM蛋白都有8條反向平行的β折疊鏈和一個(gè)EXEXK基序。

在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了3個(gè)AtTTMs基因，其中AtTTM1、2編碼的蛋白表現(xiàn)出焦磷酸酶活性和較弱的ATP水解酶活性，而AtTTM3編碼的蛋白表現(xiàn)出三聚磷酸酶活性，三個(gè)蛋白均無(wú)腺苷酸環(huán)化酶(AC)活性。

隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)了更多的TTMs基因，但是目前獲得的信息還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足以充分認(rèn)識(shí)TTM蛋白的特征，因此需要更多的研究和數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行鑒定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列，編碼的蛋白除腺苷酸環(huán)化酶活性外，還具備N(xiāo)TP水解酶活性、三聚磷酸酶活性以及較弱的焦磷酸酶活性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列，編碼三磷酸腺苷隧道金屬酶的基因?yàn)閆jAC2，ZjAC2具有如序列表中SEQ IDNO.1的DNA序列。

優(yōu)選的，ZjAC2的核心區(qū)序列是由以下核苷酸序列為引物擴(kuò)增獲得：

正向：5’-ATGGAGGTCGAAGTCAAGCT-3’；

反向：5’-CTAAGGCAGCTTTCCGGATC-3’。

一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列的衍生序列，該衍生序列為所述的ZjAC2基因序列的一個(gè)或幾個(gè)堿基的置換、插入或缺失獲得的該基因序列的變構(gòu)體。

因此，本發(fā)明采用上述一種具有三磷酸腺苷隧道金屬酶活性的ZjAC2編碼基因序列，編碼的蛋白除腺苷酸環(huán)化酶活性外，還具備N(xiāo)TP水解酶活性、三聚磷酸酶活性以及較弱的焦磷酸酶活性。

下面通過(guò)附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

附圖說(shuō)明

圖1是大腸桿菌cyaA缺陷型互補(bǔ)試驗(yàn)培養(yǎng)皿示意圖；

圖2是蛋白質(zhì)體外催化試驗(yàn)中腺苷酸環(huán)化酶活性柱狀圖；

圖3是水解酶活性試驗(yàn)柱狀圖；

圖4是Mn²⁺、Mg²⁺、Ca²⁺條件下，焦磷酸酶加入前后ATP水解酶活性變化柱狀圖；

圖5是棗在體基因瞬時(shí)表達(dá)試驗(yàn)中ZjAC2基因的表達(dá)量及cAMP的含量隨時(shí)間變化折線圖。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例一

ZjAC2基因的擴(kuò)增