[發明專利]趨化因子受體CCR6在制備抗腫瘤藥物中的應用

在審

• 申請號: 202110894682.5
• 申請日: 2021-08-05
• 公開（公告）號: CN113713092A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 黃曉文;林惠超;張太毅;宋佳澳
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學;山東優檢生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/00;A61K39/39;A61P35/00;C07K14/715;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/107
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

1.趨化因子受體CCR6在制備抗腫瘤藥物中的應用，其特征在于，所述趨化因子受體CCR6的氨基酸序列如下：

Met-Ser-Gly-Glu-Ser-Met-Asn-Phe-Ser-Asp-Val-Phe-Asp-Ser-Ser-Glu-Asp-Tyr。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述趨化因子受體CCR6為：修飾有Tn糖修飾的糖氨酸結構單元并連接有破傷風毒素蛋白輔助T細胞部分表位序列(TT_947-967)的趨化因子受體CCR6；

所述破傷風毒素蛋白輔助T細胞部分表位序列(TT_947-967)的氨基酸序列如下：

Phe-Asn-Asn-Phe-Thr-Val-Ser-Phe-Trp-Leu-Arg-Val-Pro-Lys-Val-Ser-Ala-Ser-His-Leu-Glu。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述Tn糖修飾的糖氨酸結構單元的制備方法如下：

以AgClO₄和Ag₂CO₃為混合催化劑，在嚴格無水條件下將糖基供體與糖基受體反應形成中間產物1；然后中間產物1在活化鋅粉及乙酸酐作用下，C2位疊氮基被轉化為N-乙酰氨基，再用三氟乙酸將羧基的保護基-叔丁酯切除，得到具有Tn糖修飾的糖氨酸結構單元；

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述糖基供體為3,4,6-三-O-乙?；?2-疊氮-2-脫氧-α-D-半乳吡喃糖基溴，所述糖基受體為N-(9H-芴-9-基)甲氧羰基-L-絲氨酸叔丁基酯或N-(9H-芴-9-基)甲氧羰基-L-蘇氨酸叔丁基酯。

5.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述破傷風毒素蛋白輔助T細胞部分表位序列(TT_947-967)是通過三聚乙二醇氨酸連接臂連接至趨化因子受體CCR6。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述三聚乙二醇氨酸連接臂的制備方法如下：

以三聚乙二醇為起始原料，通過控制反應用量及滴加速度，使三聚乙二醇在金屬鈉催化下與丙烯酸叔丁酯發生Michael加成反應，然后通過甲磺酰氯將三聚乙二醇另一端羥基活化，并直接與疊氮化鈉發生取代反應得到含疊氮基修飾的化合物，繼續加入Pd/C催化劑同時通入氫氣進行催化氫化反應將疊氮基還原為氨基，得到中間產物2，并進一步用Fmoc基團保護中間產物2的氨基；最后利用三氟乙酸脫除羧基的保護基叔丁酯，得到三聚乙二醇氨酸連接臂；

7.如權利要求2所述的應用，所述修飾有Tn糖修飾的糖氨酸結構單元并連接有破傷風毒素蛋白輔助T細胞部分表位序列(TT_947-967)的趨化因子受體CCR6，即為TT-CCR6糖肽，制備方法如下：

以預先負載有氨基酸的Wang樹脂為起始物，采用標準Fmoc多肽固相合成法合成CCR6多肽，接著用Tn糖修飾的糖氨酸結構單元對CCR6多肽進行糖基化修飾，得到CCR6糖肽；再通過三聚乙二醇氨酸連接臂將破傷風毒素蛋白的一段輔助T細胞表位序列(TT_947-967)與CCR6糖肽進行連接，得到TT-CCR6糖肽。

8.一種抗腫瘤疫苗，其特征在于，所述抗腫瘤疫苗包括權利要求1所述趨化因子受體CCR6或權利要求2所述修飾有Tn糖修飾的糖氨酸結構單元并連接有破傷風毒素蛋白輔助T細胞部分表位序列(TT_947-967)的趨化因子受體CCR6。

9.如權利要求8所述的抗腫瘤疫苗，其特征在于，所述抗腫瘤疫苗還包括佐劑；所述佐劑為殼聚糖/聚谷氨酸納米顆粒。

10.如權利要求8所述的抗腫瘤疫苗，其特征在于，所述抗腫瘤疫苗的制備方法如下：

(1)將殼聚糖溶解于乙酸中，配置成濃度為0.5～1.5mg/mL的殼聚糖溶液，調節pH為4-6，在不斷攪拌的條件下，向殼聚糖溶液中緩慢加入聚谷氨酸溶液，使溶液中正負電荷比為(2～10)：1，得到殼聚糖/聚谷氨酸納米顆粒懸濁液，將懸濁液于4000～6000rpm下離心35～45min，去除上清液，并將沉淀物重懸在等量的雙蒸水中，得到殼聚糖/聚谷氨酸納米顆粒溶液；

(2)將趨化因子受體CCR6或TT-CCR6糖肽配置成1-5mg/mL的溶液，然后與步驟(1)制備的殼聚糖/聚谷氨酸納米顆粒溶液混合均勻，得到殼聚糖納米顆粒CCR6糖肽腫瘤疫苗；

其中，趨化因子受體CCR6溶液或TT-CCR6糖肽溶液與殼聚糖/聚谷氨酸納米顆粒溶液的體積比為1：(8～10)。