[發明專利]一種提高乳酰-N-四糖產量的基因工程菌及其生產方法

有效

• 申請號: 202110891714.6
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113684163B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 張濤;胡苗苗;江波;李夢麗
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P19/04;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種產乳酰-N-四糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌敲除了β-半乳糖苷酶基因lacZ，并過表達β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶基因lgtA、β-1,3-半乳糖基轉移酶基因wbgO、UDP-葡萄糖-4-差向異構酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿苷轉移酶基因galT和半乳糖激酶基因galK；所述基因工程菌利用pCDFDuet-1表達lgtA和wbgO，利用pETDuet-1表達galE、galT和galK；

所述lgtA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述wbgO的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述galE的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，所述galT的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示，所述galK的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主。

3.權利要求1或2所述的基因工程菌在生產乳酰-N-四糖中的應用。

4.一種生產乳酰-N-四糖的方法，其特征在于，以乳糖和甘油為碳源，利用權利要求1或2所述的基因工程菌發酵生產乳酰-N-四糖。

5.?根據權利要求4所述的方法，其特征在于，培養至OD₆₀₀為10~13，加入終濃度為15~25g/L乳糖、0~20?g/L半乳糖和0.2~1.0?mM的IPTG。

6.?根據權利要求4所述的方法，其特征在于，發酵條件為，培養溫度為24~38℃，攪拌轉速250~850?r/min，通氣量0.8~1.2?vvm，pH?6.5~7.0。