[發明專利]一種檢測人組胺受體HRH4 mRNA表達水平的試劑、試劑盒和應用

在審

• 申請號: 202110890787.3
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113584154A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 吳善東;劉奕;吳周杰;蔣學翰;楊旭凱;王美杰;蔡偉躍
• 申請（專利權）人: 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種檢測人組胺受體HRH4 mRNA表達水平的試劑，其特征在于，所述試劑包括人組胺受體HRH4的特異性引物和探針，所述特異性引物包括HRH4-F和HRH4-R，所述探針包括H4-Probe；

所述HRH4-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH4-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述H4-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述試劑，其特征在于，所述試劑還包括內參基因GAPDH的特異性引物和探針，所述內參基因GAPDH的特異性引物包括GAPDH-F和GAPDH-R，所述探針包括G-Probe；

所述GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，所述G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

3.根據權利要求1或2所述試劑，其特征在于，在所述H4-Probe和G-Probe的5’端分別標記不同的熒光報告基團，3’端標記標記相同或不同的淬滅基團。

4.根據權利要求3所述試劑，其特征在于，所述熒光報告基團包括FAM和JOE，所述淬滅基團包括BHQ1。

5.根據權利要求1或2所述試劑，其特征在于，所述試劑中，HRH4-F、HRH4-R、H4-Probe、GAPDH-F、GAPDH-R和G-Probe的濃度分別為2.25nM、1.5nM、1.5nM、1nM、1nM、1.5nM。

6.一種一步法檢測人組胺受體HRH4 mRNA表達水平的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1～5任一項所述試劑，PCR反應液、酶混合液、ROX參比染料和無核酶水。

7.根據權利要求6所述試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括dNTP mix、MgCl₂和緩沖液；

所述酶混合液包括Taq酶、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑和Taq酶抗體；所述Taq酶、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑和Taq酶抗體的質量比為15:5:4:1。

8.根據權利要求6所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括人組胺受體HRH4的RNA標準品。

9.權利要求1～5任一項所述試劑或權利要求6～8任一項所述試劑盒在制備免疫性疾病治療用藥依據或動態監測治療效果的工具中的應用。

10.根據權利要求9所述應用，其特征在于，利用所述試劑或所述試劑盒配制反應體系，并進行qRT-PCR反應；

所述反應體系以20μl計，包括：無核酶水2.4μl，PCR反應液10μl，酶混合液0.5μl，ROX參比染料0.5μl，所述試劑2μl和標準品或RNA 5μl；

所述qRT-PCR反應的程序包括：42℃30min；95℃1min；95℃5s，60℃31s，40個循環。