[發(fā)明專利]一種用于監(jiān)測蛋白質(zhì)組樣品制備中蛋白酶解效率及誤切率的參考品及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113588833B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳亮宇;李捷;宋雷
• 申請（專利權(quán)）人: 譜天（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
• 代理公司: 南京中律知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32341
• 代理人: 沈振濤

本發(fā)明公開了一種用于監(jiān)測蛋白質(zhì)組樣品制備中蛋白酶解效率及誤切率的參考品及其應(yīng)用，本發(fā)明依據(jù)所需條件設(shè)計(jì)外源肽段組標(biāo)品，并串聯(lián)肽段成長肽標(biāo)品，兩者濃度一致，同位素標(biāo)記不同；將長肽標(biāo)品及肽段組標(biāo)品，分別加入至蛋白質(zhì)組提取過程中酶解步驟前后，伴隨完成后續(xù)過程；提取完蛋白質(zhì)組后并獲得肽段樣品，使用液質(zhì)檢測，比較肽段組標(biāo)品及長肽標(biāo)品中相應(yīng)肽段的強(qiáng)度比例，即可計(jì)算酶解效率及漏切率。使用本發(fā)明參考品可以有效監(jiān)測蛋白的酶解效率及誤切效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白組學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種用于監(jiān)測蛋白質(zhì)組樣品制備中蛋白酶解效率及誤切率的參考品及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著儀器設(shè)備及檢測技術(shù)的發(fā)展，蛋白質(zhì)組這種宏觀大數(shù)據(jù)檢測方法發(fā)展極為迅速，涉及各類科研、臨床醫(yī)學(xué)診斷、早篩、預(yù)后監(jiān)測等。

相應(yīng)的，市場上出現(xiàn)了各種蛋白質(zhì)組樣品前處理的方法，包括提取、純化、酶解等步驟，但對不同方法的提取效率及準(zhǔn)確性并沒有一個合適的監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)。

在目前蛋白質(zhì)組提取方法中，酶解效率極大影響檢測效率，酶解效率低下，則會減少最終檢測肽段的質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)度及檢測肽段數(shù)量，影響蛋白定量數(shù)據(jù)，從而得到帶有偏差的蛋白質(zhì)組定量數(shù)據(jù)。目前的酶解效率只是評判結(jié)果中鑒定到的未切開肽段種類占總共鑒定到的肽段種類數(shù)，并不能實(shí)際評判被成功酶解的蛋白的占比，即酶解效率。同時，對于常用的胰蛋白酶來說，目前也沒有方法監(jiān)控誤切的效率，即在酶切位點(diǎn)精氨酸/賴氨酸前有連續(xù)的脯氨酸，應(yīng)該不能被酶切開，但存在誤切的概率。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種用于監(jiān)測蛋白質(zhì)組樣品制備中蛋白酶解效率及誤切率的參考品及其應(yīng)用。

技術(shù)方案：為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種用于監(jiān)測蛋白質(zhì)組樣品制備中蛋白酶解效率及誤切率的參考品，包括一組外源肽段組標(biāo)品和一條長肽標(biāo)品；

所述外源肽段組標(biāo)品的設(shè)計(jì)如下：

1)每條肽段都以精氨酸(R)或賴氨酸(K)結(jié)尾，無特殊說明，肽段其他位置不存在R或K；

2)至少一條肽段A1長度略小于適用的液相質(zhì)譜儀最大檢測長度；

3)至少有一條肽段A2包含脯氨酸-精氨酸結(jié)構(gòu)(PR)，且該結(jié)構(gòu)前面或后面至少有7個氨基酸的長度；

4)至少有一條肽段A3包含脯氨酸-賴氨酸結(jié)構(gòu)(PK)，且該結(jié)構(gòu)前面或后面至少有7個氨基酸的長度；

5)至少有3條基礎(chǔ)肽段B，三條肽段的極性能夠平均分布于液相質(zhì)譜檢測范圍；

所述長肽標(biāo)品是將上述外源肽段組標(biāo)品中的各條肽段首尾相連所形成的長肽；

所述外源肽段組標(biāo)品中的各肽段與長肽標(biāo)品中對應(yīng)的肽段相比，同位素標(biāo)記不同；所述外源肽段組標(biāo)品中的各肽段之間的摩爾比例，與長肽標(biāo)品中對應(yīng)的肽段之間的摩爾比例相同。

優(yōu)選的，所述肽段A1的長度為：比適用的質(zhì)譜儀最大檢測長度少5-7個氨基酸，其余肽段長度為7-14個氨基酸。

優(yōu)選的，所述3條基礎(chǔ)肽段B的極性分為：分別可以被5-30％，30-60％，60-95％乙腈水溶液從液相色譜柱上洗脫。

優(yōu)選的，所述同位素標(biāo)記不同包括：外源肽段組標(biāo)品中各肽段均有同位素標(biāo)記，長肽標(biāo)品中對應(yīng)的肽段中沒有同位素標(biāo)記；外源肽段組標(biāo)品中各肽段沒有同位素標(biāo)記，長肽標(biāo)品中對應(yīng)的肽段中均有同位素標(biāo)記；或者外源肽段組標(biāo)品和長肽標(biāo)品中各肽段都有同位素標(biāo)記，但用以標(biāo)記的同位素不相同。優(yōu)選標(biāo)記K或R。

優(yōu)選的，所述外源肽段組標(biāo)品中的各肽段之間的摩爾比例，以及長肽標(biāo)品中對應(yīng)的肽段之間的摩爾比例相同，優(yōu)選均為1:1:1…:1，也可以為其他整數(shù)比例。