[發明專利]一種基于ELISA法定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒

在審

• 申請號: 202110887240.8
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN113588948A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 萬里明;全衛豐;王靜;劉建洋
• 申請（專利權）人: 江蘇量界生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 王燦

本發明屬于檢測試劑盒的技術領域，本發明提供了一種基于ELISA法定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒。本發明的試劑盒包括包被多克隆抗體的酶標板，酶標記單克隆抗體，新型冠狀病毒N蛋白標準品，樣品稀釋液，洗滌液，顯色液A，顯色液B和終止液等組分。經驗證，本發明中的試劑盒靈敏度較高，特異性好，與新型冠狀病毒S蛋白、新型冠狀病毒E蛋白及其它病毒蛋白均無交叉反應，檢測時間短，重復性佳，操作簡便，可以對多種樣本中的新型冠狀病毒N蛋白進行定量檢測。

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒的技術領域，尤其涉及一種基于ELISA法定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒。

背景技術

新型冠狀病毒(SARS-COV-2)是一種于2019年最新發現的新型冠狀病毒，而冠狀病毒是一類具有膜囊、基因組為線性單股正鏈的RNA病毒，分為α、β、γ、δ四個屬，此次新型冠狀病毒屬于β冠狀病毒屬，它具有極強的傳染性和致病力，自2019年年末爆發至目前為止已累計造成全球近億人次的感染病例和近數百萬人的死亡，新型冠狀病毒至少含有四種結構蛋白：棘突蛋白S(Spike Protein)、囊膜蛋白E(Envelope Protein)、膜蛋白M(MembranceProtein)和核蛋白N(Nucleocapsid Protein)。其中的S蛋白位于病毒的囊膜表面，可以與宿主細胞的表面受體ACE2結合。S蛋白的空間結構可以劃分為兩個部分，S1和S2部分，S1包含受體結合區域(RBD)。而N蛋白是冠狀病毒的主要結構蛋白，也是冠狀病毒RNA合成中的重要輔助因子，同時它也是冠狀病毒編碼蛋白中表達豐度最高的蛋白，在病毒的復制與免疫調節中發揮著重要作用，其序列保守、免疫原性高，通常可作為冠狀病毒診斷檢測的標志物。

目前對于病毒的檢測方法主要有血清學檢測(包括膠體金免疫層析法、酶聯免疫吸附法、化學發光法)和核酸檢測法(包括熒光定量PCR法、實時恒溫擴增熒光法)。其中熒光定量PCR檢測法具有較高的靈敏度和特異性，目前是臨床上檢測新冠病毒的“金標準”。熒光定量PCR法特異性強，靈敏度高，操作簡單，基因擴增和逆轉錄可同時進行，耗時短。它的局限性是檢測結果易受檢測樣本的處理方法(如采集、轉運、儲存等)、操作方法、實驗室的環境等因素的影響。膠體金法耗時短，操作簡便、易于判讀檢測結果，適合臨床快檢，但是只適用于定性診斷和輔助診斷。在新冠病毒感染的初期，患者體內未產生IgM抗體和IgG抗體或這兩種抗體的滴度均很低，可導致檢測的結果呈陰性，易造成漏檢。另外對于使用免疫抑制劑進行治療或免疫功能低下者，其檢測結果的參考價值不大。

目前對于SARS-COV-2血清學檢測多集中在SARS-COV-2抗體的檢測，針對新冠病毒特異性蛋白，特別是N蛋白的檢測的產品并不多。而新冠N蛋白作為新冠病毒中免疫原性高、表達最豐富的的蛋白，可作為新冠病毒疾病診斷的標志物。因此，開發一種定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒對于快速、準確地檢測新冠病毒以及對疫情的控制具有重要的實踐意義。

發明內容

本發明的目的在于為克服現有技術中存在的上述缺陷，提供一種基于ELISA法中的雙抗體夾心法定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種基于ELISA法定量檢測新型冠狀病毒N蛋白的試劑盒，所述試劑盒包括：包被多克隆抗體的酶標板，酶標記單克隆抗體，新型冠狀病毒N蛋白標準品，樣品稀釋液，洗滌液，顯色液A，顯色液B和終止液。

優選的，所述多克隆抗體為抗新型冠狀病毒全病毒雞卵黃IgY抗體，所述抗新型冠狀病毒全病毒雞卵黃IgY抗體的包被濃度為2～6μg/mL；