[發明專利]一種種植后階段胚胎體外培養液及其培養方法

在審

• 申請號: 202110880061.1
• 申請日: 2021-08-02
• 公開（公告）號: CN113621560A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 李達;高英卓;楊大磊
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學附屬盛京醫院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 廣州藍晟專利代理事務所(普通合伙) 44452
• 代理人: 丁海燕

本發明公開了一種種植后階段胚胎體外培養液及培養方法，該培養液專門用于哺乳動物特別是人類種植后階段(10?14天)胚胎體外培養。其中添加了多種營養成分，包括能量代謝基質、氨基酸、L?谷氨酰胺、ITS?X、β?雌二醇、孕酮、抗氧化劑、RevitaCell^TM補充劑、葉酸等，為進一步探索種植后階段(10?14天)的胚胎移植策略提供了必要基礎條件。發明的目的之二在于提供一種種植后階段胚胎體外培養的方法，使胚胎在種植后階段體外培養成為可能，從而拓展了哺乳動物特別是人類種植后階段胚胎發育的研究范圍。

技術領域

本發明涉及輔助生殖技術領域，尤其涉及一種種植后階段胚胎體外培養液及其培養方法。

背景技術

近年來，隨著胚胎工程的不斷進步，促進了相關行業的蓬勃發展，如輔助生殖(輔助生殖技術)技術、卵母細胞核移植技術、體外成熟、體外受精、單精注射等技術也得到了不斷發展，卵母細胞體外成熟、體外受精和體外培養的研究已取得了很大的成績。胚胎工程技術中的關鍵環節是對胚胎進行體外培養，隨著體外培養的研究和探討，通過完善培養液、改良培養系統、生理學家對母體內環境的認識以及機械工程的進步，可以使體外培養環境越來越接近體內環境，解決體外胚胎質量差，卵裂球不夠緊湊，抗凍性差，囊胚率不高，妊娠率不高等問題。以附圖2為例，人類胚胎從受精后第1天到第14天的發育過程，早期胚胎從1-細胞、2-細胞和8-細胞階段發育到桑椹胚、囊胚階段(早期、完整、擴張、孵化囊胚)，基于倫理學原則，人類胚胎體外培養時長不可超過受精后14天，一般情況下，種植后階段胚胎是指受精后第10-14天胚胎。

目前市面上有眾多用于人類種植前階段(受精后第1-5天)及圍種植期前期(受精后第6天)胚胎的培養液。利用現有培養液將胚胎培養至受精后第6天時，可觀察到細胞出現輕微的退化現象，提示現有培養液的成分不再適用于受精后第6天的胚胎培養。目前，尚無專門用于哺乳動物特別是人類圍種植期(受精后第6-9天)和種植后階段(受精后第10-14天)胚胎體外培養的培養液。本發明的發明人已經就圍種植期(受精后第6-9天)胚胎體外培養液在同一天提交了另一份發明專利申請，在此基礎上本發明的發明人繼續研制了一種種植后階段(受精后第10-14天)胚胎體外培養的培養液，這兩種胚胎培養液的組成成分不同，因此適合不同時期的胚胎發育，但可以先使用圍種植期胚胎體外培養液培養受精后第6-9天，然后使用種植后階段胚胎體外培養液培養受精后第10-14天。

發明內容

鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種種植后階段胚胎體外培養液，該培養液專門用于哺乳動物特別是人類種植后階段(10-14天)胚胎體外培養。其中添加了多種營養成分，包括能量代謝基質、氨基酸、L-谷氨酰胺、ITS-X、β-雌二醇、孕酮、抗氧化劑、RevitaCell^TM補充劑、葉酸等，為進一步探索種植后階段(10-14天)的胚胎移植策略提供了必要基礎條件。發明的目的之二在于提供一種種植后階段胚胎體外培養的方法，使胚胎在種植后階段體外培養成為可能，從而拓展了哺乳動物特別是人類種植后階段移植的研究范圍。

一種種植后階段胚胎體外培養液，包括：

所述的抗氧化劑為N-乙酰基-半胱氨酸、半胱氨酸、維生素E、維生素C、β-巰基乙醇中的至少一種。

進一步的，血清替代物為knock-out血清替代物、人血小板裂解物、人AB血清中的至少一種；所述的knock-out血清替代物購于Thermo Fisher公司(貨號10828028)；所述的人血小板裂解物購于Sigma-Aldrich公司(貨號SCM151)；所述的人AB血清購于Omegascientific公司(貨號HS-20)。

進一步的，基礎培養液為Advanced DMEM/F12、DMEM/F12、TCM-199、MEM、Ham′s F-10、RPMI 1640中的至少一種。

進一步的，所述的種植后階段胚胎體外培養液，還包括RevitaCell^TM，且用量為1-2X。