[發(fā)明專(zhuān)利]一種牛皮制備可注射溫敏水凝膠的方法及水凝膠的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110876331.1
• 申請(qǐng)日: 2021-07-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113546211B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張瑗;張其清;林越威;楊智炫;劉志剛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建省博特生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61L26/00
• 分類(lèi)號(hào): A61L26/00
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 吳姍姍;蔡學(xué)俊

1.一種牛皮制備可注射溫敏水凝膠的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）牛皮預(yù)處理

將牛皮去除毛發(fā)收集牛毛待用，將去除牛毛后的牛皮經(jīng)去除皮下脂肪以及清洗、脫脂處理，備用；

（2）從牛皮提取膠原蛋白

將步驟（1）得到的牛皮粉碎，放入到氯化鈉溶液中浸泡，取出清洗干凈后，加到鹽酸溶液中，并加入蛋白酶提取；然后，把固體不溶物去除，溶液加到透析袋中透析，調(diào)節(jié)pH值和濃度，得到牛皮膠原蛋白溶液；

（3）從牛毛提取半胱氨酸

將步驟（1）收集到的牛毛加到濃鹽酸內(nèi)反應(yīng)；把固體不溶物去除，對(duì)溶液進(jìn)行脫色后，調(diào)節(jié)溶液的pH，收集析出物；把析出物加到稀鹽酸內(nèi)，加入金屬粒后進(jìn)行反應(yīng)，過(guò)濾，收集濾液；對(duì)濾液通入硫化氫，過(guò)濾，然后進(jìn)行pH和濃度的調(diào)節(jié)，得到牛毛半胱氨酸溶液；

（4）溫敏水凝膠干粉制備

對(duì)步驟（2）得到的牛皮膠原蛋白溶液加入N-羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，加入步驟（3）得到的牛毛半胱氨酸溶液，攪拌，加入無(wú)水乙醇，收集釋出物并用無(wú)水乙醇沖洗，干燥，分裝到西林瓶，滅菌，得到溫敏水凝膠干粉；

（5）可注射溫敏水凝膠制備

把生理鹽水加到步驟（4）得到的溫敏水凝膠干粉，攪拌均勻后用注射器吸出，得到可注射溫敏水凝膠；

步驟（2）所述的氯化鈉溶液質(zhì)量為牛皮質(zhì)量的10~20倍，濃度為0.01~0.1 M；所述的浸泡時(shí)間為2~5小時(shí)；

步驟（2）所述的鹽酸溶液濃度為0.01~0.1 M；所述的蛋白酶為胃蛋白酶；步驟（2）所述的提取時(shí)間為6~8小時(shí)；步驟（2）所述的透析袋的截留分子量為1000~5000 Da；

步驟（2）所述的調(diào)節(jié)pH值和濃度為使用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉把pH值調(diào)節(jié)到4.5~6.5，用pH值4.5~6.5的磷酸緩沖溶液把膠原蛋白溶液濃度調(diào)節(jié)到0.5~5wt%；

步驟（3）所述的濃鹽酸濃度為5~10 M、質(zhì)量為牛毛質(zhì)量的1.5~3倍；步驟（3）所述將步驟（1）收集到的牛毛加到濃鹽酸內(nèi)反應(yīng)為100~150 ^oC反應(yīng)5~10小時(shí)；所述的對(duì)溶液進(jìn)行脫色為加入溶液重量0.1~0.5倍的活性炭，加熱煮沸1~5小時(shí)后分離固體；所述脫色后，把溶液的pH調(diào)節(jié)為4.5~5；

步驟（3）所述的稀鹽酸濃度為0.01~0.1 M，重量為析出物重量的50~100倍；所述的金屬粒為錫粒；步驟（3）所述加入金屬粒進(jìn)行反應(yīng)為在25~85 ^oC反應(yīng)1~18小時(shí)；所述硫化氫添加量為1~10 L；步驟（3）所述進(jìn)行pH和濃度的調(diào)節(jié)為使用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉把pH值調(diào)節(jié)到4.5~6.5，用pH值4.5~6.5的磷酸緩沖溶液把半胱氨酸溶液濃度調(diào)節(jié)到0.1~1wt%；

步驟（4）所述的N-羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽為N-羥基琥珀酰亞胺0.0005~0.005 g/ml，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0.001~0.005 g/ml；步驟（4）中原料用量關(guān)系為：按照質(zhì)量比計(jì)，步驟（3）得到的牛皮膠原蛋白溶液:牛毛半胱氨酸溶液=1~5:1；步驟（4）所述的攪拌時(shí)間為4~36小時(shí)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛皮制備可注射溫敏水凝膠的方法，其特征在于：步驟（1）所述的脫脂為將去除牛毛的牛皮浸泡于5~10wt%碳酸鈉溶液中10~30分鐘；碳酸鈉溶液的體積為牛皮體積2~5倍。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述方法制備的可注射溫敏水凝膠。

4.如權(quán)利要求3所述的可注射溫敏水凝膠在制備腔洞型傷口修復(fù)材料上的應(yīng)用。