[發明專利]一種快速檢測重金屬鎘的免疫微球層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202110865492.0
• 申請日: 2021-07-29
• 公開（公告）號: CN113607951A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 王元鳳;程利增;徐乃豐;朱巧娟
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/53;G01N33/52
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 顧艷哲

本發明公開了一種快速檢測重金屬鎘的免疫微球層析試紙條及其制備方法，該免疫微球層析試紙條，包括底板，底板上從左到右依次設置樣品墊、免疫微球結合墊、顯色區和吸水區；結合墊為紅色羧基微球與抗Cd²⁺?ITCBE?載體蛋白(CP)單克隆抗體制備的免疫微球檢測探針。該免疫微球層析試紙條制備方法：1)包被原Cd²⁺?ITCBE?CP的合成；2)抗Cd²⁺?ITCBE?CP單克隆抗體的篩選；3)免疫微球探針的制備；4)試紙條的組裝。該試紙條的裸眼檢測限可達0.2ng/mL，且與常見的重金屬離子(As³⁺、Pb²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺、Ni⁺和Cr³⁺)無交叉反應，對Cd²⁺特異性強。該試紙條操作簡單，可在3?5分鐘內實現樣品中痕量Cd²⁺的快速檢測。

技術領域

本發明涉及重金屬快速檢測技術領域，尤其是涉及一種快速檢測重金屬鎘的免疫微球層析試紙條及其制備方法。

背景技術

現代社會快速發展，重金屬廣泛應用于玻璃、電池、油漆和涂料等化工領域中。然而，隨之而來的重金屬污染給人類的日常生活和健康帶來了潛在危害。鎘是一種最常見的強毒性重金屬，被我國列為重點防護的重金屬污染物之一。因此，有必要開發一種高靈敏的實時快檢技術，以有效監測環境中重金屬鎘的分布及污染治理情況。

目前，已公開的重金屬鎘的快速檢測方法包括以下幾種：(1)常規鎘顯色劑試紙條，如發明專利CN 107228855A公開了一種快速檢測煙葉重金屬鎘的試紙條的制備方法及其檢測方法、發明專利CN 103776826A公開了帶有掩蔽劑的檢測中草藥鎘含量的試紙條。該試紙條以鎘顯色劑檢測重金屬鎘，但鎘顯色劑對Cd²⁺特異性差。雖然加入掩蔽劑以消除其它重金屬離子的干擾，但仍然存在與其它重金屬離子的交叉反應，對Cd²⁺特異性難以達到檢測要求。此外，該試紙條檢測是基于鎘顯色劑顏色變化，存在樣品背景顏色干擾，靈敏度(檢測限僅為0.5μg/mL)也有待提高。(2)熒光免疫層析試紙條，如發明專利CN 111198264A、CN109870435A和CN 108593619A公開了檢測重金屬鎘的熒光免疫層析試紙條。該重金屬鎘檢測試紙條具有靈敏度(檢測限約為10ng/mL)較強、準確度高的優點，但通常需要儀器輔助進行較靈敏的讀數，且需要專業科研人員的操作，不能大規模示范應用。(3)膠體金免疫層析試紙條，如發明專利CN 104090110A、CN 104007262A、CN 101576563A和CN 101451998A公開了測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條。膠體金免疫層析試紙條以膠體金作為信號分子，但它的檢測靈敏度往往受限制(檢測限僅為0.2μg/mL)，且與Hg²⁺和Zn²⁺有一定的交叉污染。(4)酶聯免疫試劑盒，如發明專利CN 106872709A、CN 104155424A公開了一種基于直接競爭酶聯免疫法檢測Cd²⁺試劑盒。其原理是樣品或標準品中的Cd²⁺和酶標半抗原競爭性地與抗Cd²⁺單克隆抗體結合，當加入底物顯色液時，樣品吸光度值與其殘留的Cd²⁺含量呈負相關，與標準曲線比較，以計算出樣品中Cd²⁺的含量。該試劑盒具有靈敏度高的優點，然而檢測流程繁瑣，需要儀器輔助讀數和專業科研人員操作，且存在背景干擾，不能大規模示范應用。

免疫微球層析試紙條與膠體金免疫層析試紙條的顯色原理類似，是通過將攜帶不同功能基團的乳膠微球包裹不同顏色的染料而顯色。乳膠微球所攜帶的活性基團，能通過相應的化學反應與抗原或抗體相結合，合成一種檢測探針?；趥攘髅庖邔游鲈恚苽涞臋z測探針，可以制成針對不同待測物的免疫微球層析試紙條。