[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110865492.0
• 申請(qǐng)日: 2021-07-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113607951A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王元鳳;程利增;徐乃豐;朱巧娟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/53;G01N33/52
• 代理公司: 上海科盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 顧艷哲

1.一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l，其特征在于，它包括底板，所述底板從左向右依次設(shè)置有樣品墊、免疫微球結(jié)合墊、顯色區(qū)和吸水區(qū)；

所述的免疫微球結(jié)合墊設(shè)有抗Cd²⁺-ITCBE單克隆抗體與羧基微球結(jié)合形成的免疫微球探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l，其特征在于，所述試紙條寬度為3-10mm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l，其特征在于，所述的顯色區(qū)包括T線和C線；

所述T線為包被原Cd²⁺-ITCBE-CP；

所述C線為羊抗鼠抗體。

4.如權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其步驟為：

1)包被原Cd²⁺-ITCBE-CP的合成：以對(duì)重金屬Cd²⁺敏感的螯合劑ITCBE為中間物質(zhì)，將Cd²⁺和CP連接在一起，合成高效的重金屬鎘完全抗原；

2)抗Cd²⁺-ITCBE-CP單克隆抗體的篩選：用所述包被原Cd²⁺-ITCBE-CP多次免疫小鼠，選擇合適的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合，篩選細(xì)胞株；采用體內(nèi)誘生腹水法大規(guī)模制備單克隆抗體；

3)免疫微球探針的制備：微球活化后，加入PBS混勻，然后加入所述抗Cd²⁺-ITCBE-CP單克隆抗體，搖床孵育，再加入相應(yīng)CP溶液搖床封閉；離心后棄上清，加入微球儲(chǔ)存液復(fù)溶，2-8℃保存；

4)試紙條的組裝：按從左至右的順序?qū)悠穳|、免疫微球結(jié)合墊、顯色區(qū)和吸水區(qū)依次粘貼在所述的底板上，組裝成重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述的對(duì)重金屬Cd²⁺敏感的螯合劑為ITCBE；

所述的CP為BSA、OVA或KLH中的一種或幾種；

所用的ITCBE與OVA摩爾比為10：1-30：1，ITCBE與BSA摩爾比為10：1-40：1，ITCBE與KLH摩爾比為2000：1-4000：1。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述的包被原Cd²⁺-ITCBE-CP的合成方式分為兩種，一是ITCBE先與Cd²⁺偶聯(lián)再與CP偶聯(lián)，二是ITCBE先與CP偶聯(lián)，再與Cd²⁺偶聯(lián)。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟2)中，所述的免疫為3-8次；

所篩選的細(xì)胞株僅分泌抗ITCBE-Cd²⁺的單克隆抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述微球?yàn)榧t色羧基微球，其粒徑為100-500nm；

所選擇的抗Cd²⁺-ITCBE-CP單克隆抗體為3C9、4A9、4H2或7D3中的一種或幾種。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所用的微球與抗Cd²⁺-ITCBE-CP單克隆抗體的比為30：1-60：1(v/w)；

所述的免疫微球探針制備條件為37℃搖床孵育2h，再加入相應(yīng)CP溶液37℃搖床封閉30min。

10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)重金屬鎘的免疫微球?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，步驟4)中，所述的免疫微球結(jié)合墊噴涂免疫微球檢測(cè)探針，所述的顯色區(qū)包括T線和C線，其中：

所述T線為包被原Cd²⁺-ITCBE-CP，劃線濃度為0.05-0.15mg/mL；

所述C線為羊抗鼠抗體，劃線濃度為0.02-0.20mg/mL。