[發明專利]酯酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 202110853890.0
• 申請日: 2021-07-28
• 公開（公告）號: CN113308450B
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 洪浩;詹姆斯·蓋吉;肖毅;張娜;焦學成;楊益明;李娟;黃啟星
• 申請（專利權）人: 凱萊英醫藥集團（天津）股份有限公司
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/40;C12P7/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 路秀麗

本發明提供了一種酯酶突變體及其應用。通過在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列基礎上經過理性設計和幾輪酶進化篩選得到的酯酶突變體，相比野生型酯酶發生了蛋白質結構和功能的改變，在實際應用時，酯酶突變體的催化活性和/或立體選擇性得到了極大的提高，且當體系中含有某些有機助溶劑時，仍具有相對穩定的催化活性和/或立體選擇性。另外，酯酶突變體催化活性和/或立體選擇性的提高，在一定程度上降低了酶的用量，降低了后處理的難度，適合工業化生產。

技術領域

本發明涉及工業酶制備領域，具體而言，涉及一種酯酶突變體及其應用。

背景技術

在醫藥、農藥及精細化工工業的發展過程中，有機合成面臨著越來越大的挑戰，在藥物分子中，往往只有一個立體異構體有治療作用，另外的立體異構體則沒有治療作用或甚至有副作用。在傳統的有機合成中通常引入保護和去保護步驟來彌補反應的化學和區域選擇性的不足，而生物酶催化反應通常具有較高催化活性和/或立體選擇性，通常在中性和室溫的條件下進行，環境污染少，因此，生物酶催化技術在有機合成方面的應用具有非常重大的實際應用價值。

酯酶是一種水解酶，是催化酯水解的酶總稱，廣泛存在于植物、動物和微生物中。動物胰臟酯酶和微生物酯酶是主要來源，主要是真菌，其次是細菌，不同來源的酯酶具有不同的催化特點和催化活力。酯酶已經實現商品化，在食品，醫藥，化工等領域起著重要作用。

CN 107058362 A中公開了酯酶基因est816及其重組酯酶，在大腸桿菌表達體系和畢赤酵母表達體系中具有高效可溶性表達，并且重組酯酶對擬除蟲菊酯類農藥（包括氯氟氰菊酯，氯氰菊酯，氰戊菊酯和溴氰菊酯）具有強降解作用，降解率高達90%以上，在擬除蟲菊酯類農藥殘留方面有廣闊的應用前景。CN 106929493 A中公開了一種內酯酶，其氨基酸序列系為將編號5的序列的第167的氨基酸有纈氨酸突變為組氨酸，提高了對α-玉米赤霉烯醇的降解效率。

生物催化劑在有機合成中應用時，多數情況下是非天然底物，而對于非天然底物時，它們的反應活性、穩定性和選擇性常常不太好，因此能夠真正被廣泛應用的酯酶并不多。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種酯酶突變體及其應用，以解決現有技術中的酯酶活性低和/或立體選擇性低的問題。