[發(fā)明專利]一株昆蟲蜚蠊腸道內(nèi)生鏈霉菌WA5-1-7及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110833251.8
• 申請(qǐng)日: 2021-07-22
• 公開（公告）號(hào): CN113684144B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬艷;金小寶;劉文彬;汪潔;余田甜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12Q1/04;C12Q1/689;A01N63/28;A01P1/00;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 陸豐艷

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株昆蟲蜚蠊腸道內(nèi)生鏈霉菌WA5?1?7及其應(yīng)用，本發(fā)明提供的菌株WA5?1?7保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為GDMCC NO.61630；是從美洲大蠊腸道中分離得到的內(nèi)生菌，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹分析等初步鑒定其種屬。本發(fā)明提供的菌株WA5?1?7的次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌具有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)肺炎克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌具有一定抑菌活性，發(fā)酵液粗提物中放線菌素含量高達(dá)80％，放線菌素D和放線菌素X2產(chǎn)量分別達(dá)到138.36mg/L和227.21mg/L。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株昆蟲蜚蠊腸道內(nèi)生鏈霉菌WA5-1-7及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

放線菌是發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物和多種活性先導(dǎo)化合物的資源寶庫(kù)。在放線菌中鏈霉菌數(shù)量占大部分，從放線菌中發(fā)現(xiàn)鏈霉素等多種抗生素約80％以上來(lái)源于鏈霉菌。但近年來(lái)，陸生和海洋放線菌候選藥物的命中率不斷下降，這使科學(xué)家的注意力轉(zhuǎn)移到內(nèi)生放線菌，它們處于特殊的生態(tài)位，這可能會(huì)成為天然生物活性物質(zhì)豐富的資源。昆蟲內(nèi)生菌是棲息在昆蟲體內(nèi)的一類特境微生物，目前尚未發(fā)現(xiàn)無(wú)內(nèi)生菌棲息的昆蟲，因此昆蟲體內(nèi)蘊(yùn)藏著龐大的微生物資源。

美洲大蠊(Periplaneta americana)俗稱“蟑螂”，屬節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱有翅亞綱蜚蠊目，是地球上已知的生命力最頑強(qiáng)、最古老的昆蟲類群之一。其在《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》、《新修本草》等均有入藥的記載，性寒、味咸、歸肝、脾、腎經(jīng)，具有活血散瘀、健脾消疳、利水消腫生肌等功效。現(xiàn)代研究表明美洲大蠊具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、組織修復(fù)和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等藥理作用。美洲大蠊長(zhǎng)期生活在廚房、下水道、垃圾堆等黑暗潮濕存在大量病原微生物環(huán)境中，仍具有極強(qiáng)生命力和繁殖能力，提示美洲大蠊的藥理作用以及其較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力、防御外來(lái)病原菌侵染的能力，與其腸道內(nèi)豐富的微生物菌群可能存在密切的關(guān)系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一株從美洲大蠊腸道中分離篩選出的內(nèi)生鏈霉菌WA5-1-7及其應(yīng)用。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供了一株昆蟲蜚蠊腸道內(nèi)生鏈霉菌WA5-1-7，所述鏈霉菌WA5-1-7為從美洲大蠊腸道中分離、篩選獲得的內(nèi)生菌，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，地址為中國(guó)，廣東，廣東省微生物研究所，保藏菌種名稱為Streptomvces sp.WA5-1-7，分類學(xué)名稱為Streptomvces sp.，保藏編號(hào)為GDMCC NO.61630，保藏日期為2021年4月26日，保藏年限為30年。

本申請(qǐng)的另一目的是提供一種如上述方案所述鏈霉菌WA5-1-7的鑒定方法，包括以下過(guò)程：

(1)從美洲大蠊腸道中分離得到159株放線菌，篩選出具有良好抗白色念珠菌活性的菌株15株，進(jìn)一步篩選出抗菌性好的菌株WA5-1-7；

(2)對(duì)步驟(1)篩選出的抗菌性好的菌株WA5-1-7進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹分析方法進(jìn)行生物學(xué)分類鑒定，即可。

優(yōu)選的，步驟(2)中所述形態(tài)學(xué)觀察為對(duì)菌株WA5-1-7在高氏1號(hào)培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)形態(tài)進(jìn)行觀察，通過(guò)革蘭氏染色法觀察菌株WA5-1-7的形態(tài)，通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察菌株WA5-1-7的形態(tài)。

優(yōu)選的，步驟(2)中所述分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹分析過(guò)程為：

S1、對(duì)菌株WA5-1-7的DNA進(jìn)行提取，選擇細(xì)菌16S rRNA通用引物27F和引物1492R將所提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

S2、將步驟S1所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序得到的序列提交至NCBI中進(jìn)行BLAST同源性比對(duì)，同時(shí)將序列信息提交至GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲取菌株WA5-1-7 16S rRNA的登錄編號(hào)；